新冠病毒是一种单链RNA病毒,常用“荧光RT-PCR技术”进行检测,方法是取检测者的mRNA在试剂盒中逆转录出cDNA,并大量扩增,同时利用盒中荧光标记的新冠病毒核酸探针来检测PCR产物中是否含有新冠病毒的cDNA,在检测过程中,随着PCR的进行,反应产物不断累积,“杂交双链”荧光信号的强度也等比例增加,可通过荧光强度的变化监测产物量的变化,从而得到一条荧光扩增曲线图(如图)。请回答下列问题:
(1)题中“荧光RT-PCR技术”所用的试剂盒中应该含有 逆转录酶逆转录酶酶、热稳定DNA聚合酶(Taq酶)热稳定DNA聚合酶(Taq酶)酶、检测者mRNA、荧光标记的新冠病毒核酸探针荧光标记的新冠病毒核酸探针、引物,dNTP、缓冲体系。
(2)如果要同时扩增两种基因,则试剂盒中的引物应该有 44种,引物的作用是 使热稳定DNA聚合酶能够从引物的3'端开始连接脱氧核苷酸使热稳定DNA聚合酶能够从引物的3'端开始连接脱氧核苷酸。
(3)图中“平台期”出现的最可能的原因是 试剂盒中的原料(引物,探针)数量一定,超出一定的循环数后,荧光标记的“杂交双链”不再增加试剂盒中的原料(引物,探针)数量一定,超出一定的循环数后,荧光标记的“杂交双链”不再增加。理论上,在检测过程中,有荧光标记的“杂交双链”出现,则说明检测结果呈 阳阳(填“阴”或“阳”)性,但为了保证检测结果的准确性,一般要达到或超过阈值时才确诊。现有甲乙两个待检样本,检测时都出现了上述形态的曲线,但甲的a点比乙的a点明显左移,请给这种结果做出科学合理的解释(试剂盒合格且正常,操作过程规范且准确):甲样本中的新冠病毒含量更高,达到阈值所需的循环数更少甲样本中的新冠病毒含量更高,达到阈值所需的循环数更少。
【考点】DNA片段的扩增与电泳鉴定.
【答案】逆转录酶;热稳定DNA聚合酶(Taq酶);荧光标记的新冠病毒核酸探针;4;使热稳定DNA聚合酶能够从引物的3'端开始连接脱氧核苷酸;试剂盒中的原料(引物,探针)数量一定,超出一定的循环数后,荧光标记的“杂交双链”不再增加;阳;甲样本中的新冠病毒含量更高,达到阈值所需的循环数更少
【解答】
【点评】
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