细菌的每一个质粒都是复制子，作为一个复制单位，至少要有一个复制起点，即ori位点。将ori区克隆到一个不能自主复制的环状双链DNA分子上，并引入到原核细胞后，该重组DNA具有自主复制能力。如质粒pBR322，它包含以下几个部分的DNA：①来源于pMB1质粒的复制起点（ori）及rop区；②来源于质粒pSC101的四环素抗性基因（tetr）；③来源于转座子Tn3的氨苄青霉素抗性基因（ampr）。科学家计划将人胰岛素基因转入大肠杆菌中作为生物反应器来大量生产人胰岛素，它们先将人胰岛素基因处理后获得以下片段，再与质粒pBR322构建基因表达载体。
（1）图中所示的目的基因不能直接从基因组文库中获得，原因是 图中所示胰岛素基因的编目区是连续的，而人体（真核生物）细胞中基因的编码区是不连续的图中所示胰岛素基因的编目区是连续的，而人体（真核生物）细胞中基因的编码区是不连续的，处理思路是 以真核生物胰岛B细胞中胰岛素转录的成熟mRNA为模板，逆转录获得对应的cDNA以真核生物胰岛B细胞中胰岛素转录的成熟mRNA为模板，逆转录获得对应的cDNA。
（2）可以选择 PvuⅡ和SalⅠPvuⅡ和SalⅠ（填限制酶）进行处理，最终获得含有目的基因的高拷贝数质粒。
（3）研究发现，作为受体细胞的大肠杆菌细胞内本来就存在图3所示的质粒，且构建的基因表达载体中，既存在重组质粒、也存在普通质粒（pBR322）。为了更好地筛选出成功导入了重组质粒的细胞，研究人员计划使用影印法：将导入质粒的细胞接种在完全培养基中，待菌落长出后将培养皿倒置于包有灭菌丝绒布的木质圆柱印章上，使其沾上来自平板上的菌落。然后可把这一“印章”上的菌落分别接种到不同的选择培养基平板上（图4）。
应选择 SalⅠ和BamHⅠSalⅠ和BamHⅠ（填限制酶）进行处理，培养基A、B中分别添加 氨苄青霉素氨苄青霉素、四环素四环素（填抗生素），导入重组质粒的细胞是 1、31、3（填序号）。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】图中所示胰岛素基因的编目区是连续的，而人体（真核生物）细胞中基因的编码区是不连续的；以真核生物胰岛B细胞中胰岛素转录的成熟mRNA为模板，逆转录获得对应的cDNA；PvuⅡ和SalⅠ；SalⅠ和BamHⅠ；氨苄青霉素；四环素；1、3
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：14引用：1难度：0.5
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2．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6 -
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