草甘膦是一种非选择性除草剂，杀死杂草的同时也杀死农作物。它与植物体内的PEP（磷酸烯醇式丙酮酸）结构相似，可与PEP竞争结合EPSP合酶，阻止PEP转化，影响植物细胞正常代谢。我国科学家从草甘膦施用土壤中的某微生物体内获取GR79基因（草甘膦抗性基因），并将其导入植物体细胞中获得抗草甘膦的转基因植物。据图回答下列问题：
（1）GR79基因发挥抗草甘膦作用的机理可能是 GR79基因表达的产物阻止（抑制）草甘膦与PEP竞争结合EPSP合酶GR79基因表达的产物阻止（抑制）草甘膦与PEP竞争结合EPSP合酶。从分离得到的某土壤微生物体内获取含有GR79基因的质粒，并将其保存在某细菌群体（受体菌）中，各个受体菌分别含有该微生物的不同的基因，这些受体菌群中该微生物的所有DNA序列克隆的汇总，称为 基因组文库基因组文库。
（2）据图推测，利用PCR技术扩增GR79基因时，需设计能与该基因两条模板链3′端 碱基互补配对碱基互补配对的引物；同时为构建该基因表达载体，需在引物1和引物2的 5′端5′端端加上限制酶 PstⅠ和XhoⅠPstⅠ和XhoⅠ的识别序列。
（3）实验中常采用 农杆菌转化农杆菌转化法将GR79基因表达载体导入植物受体细胞；为避免该基因在近缘农作物中传播，可将其导入植物受体细胞的 细胞质DNA上（或叶绿体DNA或线粒体DNA或叶绿体和线粒体DNA上）细胞质DNA上（或叶绿体DNA或线粒体DNA或叶绿体和线粒体DNA上）；除温度、酸碱度等环境因素外，影响该基因导入植物受体细胞成功率的因素有 农杆菌的种类和活性、受体细胞的基因型和活性等农杆菌的种类和活性、受体细胞的基因型和活性等。
（4）为检测GR79基因是否导入植物体细胞，可在培养基中添加 草甘膦草甘膦筛选含该基因的受体细胞；也可利用 核酸分子杂交核酸分子杂交技术更加精准地进行检测，若待检DNA中含有该基因，则会发现硝酸纤维素膜上会出现放射性或荧光条带放射性或荧光条带。
（5）经检测，科研人员发现部分获得GR79基因的植物幼苗不具有抗草甘膦的能力，原因可能是 草甘膦抗性基因转录或翻译异常草甘膦抗性基因转录或翻译异常。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】GR79基因表达的产物阻止（抑制）草甘膦与PEP竞争结合EPSP合酶；基因组文库；碱基互补配对；5′端；PstⅠ和XhoⅠ；农杆菌转化；细胞质DNA上（或叶绿体DNA或线粒体DNA或叶绿体和线粒体DNA上）；农杆菌的种类和活性、受体细胞的基因型和活性等；草甘膦；核酸分子杂交；放射性或荧光条带；草甘膦抗性基因转录或翻译异常
【解答】
【点评】
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发布：2024/11/30 2:0:1组卷：17引用：1难度：0.4
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（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6
