图甲为应用基因编辑去除CFTR基因（控制CFTR蛋白的合成），获得患囊性纤维病的编辑小鼠4的培育流程。请回答下列问题：

（1）对1号小鼠进行超数排卵处理，收集并选取处在

减数第二次分裂中期

减数第二次分裂中期

时期的卵母细胞用于核移植。
（2）采集2号小鼠的组织细胞，放置于37℃的CO₂培养箱中培养，其中CO₂的作用是

维持培养液的pH

维持培养液的pH

。
（3）尝试用基因疗法给刚出生的编辑小鼠4号治疗囊性纤维病。其中，将CFTR基因插入质粒中，构建了基因表达载体，其部分结构和酶切位点的示意图如乙，图中E1～E，四种限制酶产生的黏性末端各不相同。据图推断，在将CFTR基因插入质粒时，应使用

E₂、E₄

E₂、E₄

限制酶，目的是

保证 CFTR基因完整且能与载体正确连接

保证 CFTR基因完整且能与载体正确连接

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（4）为获得更多基因编辑小鼠，可在胚胎移植前对胚胎进行

分割

分割

，所需要的主要仪器设备包括

实体显微镜和显微操作仪

实体显微镜和显微操作仪

。
（5）请设计一个实验，从分子水平检测CFTR基因是否被导入编辑小鼠4号并正常表达。
①实验思路：

用含CFTR基因的放射性同位素探针与提取的编辑小鼠4号 DNA 进行 DNA 分子杂交，观测是否出现相应的杂交带；利用 CFTR蛋白抗体与编辑小鼠4号提取的蛋白质进行抗原-抗体杂交，观测是否出现相应的杂交带

用含CFTR基因的放射性同位素探针与提取的编辑小鼠4号 DNA 进行 DNA 分子杂交，观测是否出现相应的杂交带；利用 CFTR蛋白抗体与编辑小鼠4号提取的蛋白质进行抗原-抗体杂交，观测是否出现相应的杂交带

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②预期结果：

若观测到相应的杂交带，则 CFTR基因被导入编辑小鼠4号，否则没有；若观测到相应的杂交带，则 CFTR基因正常表达，否则没有

若观测到相应的杂交带，则 CFTR基因被导入编辑小鼠4号，否则没有；若观测到相应的杂交带，则 CFTR基因正常表达，否则没有

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