Rag₂基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对Rag₂基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如图：

（1）步骤①中，在核移植前应去除卵母细胞的

细胞核

细胞核

。小鼠体细胞体外培养时，所需气体主要是O₂和CO₂，其中CO₂的作用是维持培养液（基）的

pH值（或酸碱度）

pH值（或酸碱度）

。
（2）步骤②中，重组胚胎培养到

囊胚

囊胚

期时，可从其内细胞团分离出ES细胞。体外培养条件下，ES细胞在

饲养层

饲养层

细胞上，能够维持只增殖不分化的状态。
（3）步骤③中，需要构建含有Rag₂基因的表达载体。可以根据Rag₂基因的

核苷酸序列

核苷酸序列

设计引物，利用PCR技术扩增Rag₂基因片段。用HindⅢ和PstⅠ限制酶分别在片段两侧进行酶切获得Rag₂基因片段。为将该片段直接连接到表达载体，所选择的表达载体上应具有

HindⅢ和PstⅠ

HindⅢ和PstⅠ

酶的酶切位点。
（4）为检测Rag₂基因的表达情况，可提取治疗后小鼠骨髓细胞的

蛋白质

蛋白质

，用

抗Rag₂蛋白

抗Rag₂蛋白

的抗体进行杂交实验。