研究发现，斑马鱼性腺体衍生因子基因（gsdr）主要在精巢中表达。为研究gsdf相关分子的调控机制模型，科研人员构建了以Gamma-crystalin启动子（使相关基因在眼部晶状体特异性表达）启动的斑马鱼gsdf基因与增强型绿色荧光蛋白基因（egfp） 融合的荧光素酶报告质粒Tg （Crystal-pro-gsdf-2A-egfp,部分构建过程如图1所示），最终成功获得表达gsdf基因的转基因斑马鱼。
（1）科研人员提取斑马鱼精巢内的总RNA，经 逆转录逆转录过程获得cDNA，并以其为模板，通过PCR技术可在总cDNA中专一性的扩增出gsdf基因的cDNA，其原因是 引物是根据gsdf基因的一段已知序列设计合成的（或：引物能与gsdf基因的cDNA特异性结合）引物是根据gsdf基因的一段已知序列设计合成的（或：引物能与gsdf基因的cDNA特异性结合）。
（2）图1中对gsdf基因、2A基因和报告质粒载体的切割共需用到 33种限制酶。将酶切后的gsdf基因、2A基因定向连接到用 EcoRI、NotIEcoRI、NotI双酶切的报告质粒载体中，最终通过系列操作构建出荧光素酶报告质粒Tg。
（3）图1中的2A基因表达的2A肽序列具有“自剪切”的能力，将其置于质粒上gsdf基因和egfp基因之间，可以避免这两个基因表达出一个融合蛋白。2A肽的“自剪切”原理如图2，字母G和P代表2A肽最末端的两个氨基酸。
据图2推测2A肽具有“自剪切”能力的原因是 G与P之间未形成肽键G与P之间未形成肽键。
（4）某同学认为：gsdf基因在转基因斑马鱼眼部晶状体中特异性表达，就成功建立和获得了能稳定遗传的转基因斑马鱼模型。请对该同学的观点进行评价并说明理由。 不合理。要将获得的转基因斑马鱼个体与野生型个体杂交，若后代能够表达gsdf基因，（多代杂交获得纯合子）才能说明模型成功建立不合理。要将获得的转基因斑马鱼个体与野生型个体杂交，若后代能够表达gsdf基因，（多代杂交获得纯合子）才能说明模型成功建立。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】逆转录；引物是根据gsdf基因的一段已知序列设计合成的（或：引物能与gsdf基因的cDNA特异性结合）；3；EcoRI、NotI；G与P之间未形成肽键；不合理。要将获得的转基因斑马鱼个体与野生型个体杂交，若后代能够表达gsdf基因，（多代杂交获得纯合子）才能说明模型成功建立
【解答】
【点评】
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发布：2024/4/20 14:35:0组卷：52引用：2难度：0.6
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（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6
