重组人纤溶酶原激活剂（hPA）能够高效特异性地溶解血栓，目前已培育成功rhPA转基因兔，作为乳腺生物反应器批量生产药物。某科研团队构建的PCL25/hPA重组质粒如图1所示（该质粒以β-casein作为调控序列，以CMV为启动子，图1中SadⅠ、XhoⅠ、NotⅠ所在位置表示相关限制酶切点），图2为培育rhPA转基因兔时用的乳腺特异性表达载体及PCR检测原理图（PCR-F、PCR-R为引物序列）。请回答下列问题：

（1）据图1推测，PCL25/rhPA重组质粒是在PCL25质粒的

XhoⅠ

XhoⅠ

限制酶切位点处插入化学合成的rhPAcDNA片段构建而成。rhPA基因上游的CMV能被

RNA聚合酶

RNA聚合酶

识别并结合，从而开启转录过程。
（2）为获得图2的乳腺特异性表达载体需用

SalⅠ和NotⅠ

SalⅠ和NotⅠ

切割PCL25/rhPA重组质粒使之线性化。PCR-F和PCR-R设计时依据的是

CMV和rhPA基因的部分脱氧核苷酸序列

CMV和rhPA基因的部分脱氧核苷酸序列

序列。
（3）对实验得到的1～6号仔兔进行PCR及产物检测，得到图3所示结果，则成功导入rhPA基因的仔兔有

2、3、5、6

2、3、5、6

。（注：M道条带可作为双链线状DNA分子量大小的参照，7道为显微注射片段PCR扩增产物作阳性对照）
（4）生长激素（GH）可促进动物细胞增殖和乳腺生长发育及维持泌乳。研究人员将GH基因导入rhPA单转基因兔体内，获得rhPA/GH双转基因兔，以期提高兔乳清中的rhPA表达量。
①完成下列表格：

实验目的	简要操作过程
显微注射用基因片段的准备	将PCL25/GH质粒双酶切而线性化，电冰分离不同大小分子量的基因片段，回收真核基因片段待用
对兔进行 超数排卵 超数排卵 和同期发情处理	选取3只未发情的rhPA单转基因兔作为供体（标号a、b、c），适量注射FSH/hCG（两种促性腺激素），与正常公兔配种，在母兔的 输卵管 输卵管 （填部位）形成受精卵。在供体兔配种的同时，选取成年健康新西兰母兔作为受体，耳缘静脉注射适量hCG。
双转基因兔的制备	将显微注射基因片段导入受精卵的原核内，适宜条件培养，胚胎移植。
转基因兔的整合筛选	无菌剪取新生仔兔的耳尖组织少许，提取基因组。针对rhPA和GH两种基因，设计 2 2 对引物进行PCR检测。PCR反应产物进行1%琼脂糖凝胶电泳，确定条带大小是否正确。
rhPA含量测定	分别测定 rhPA单转基因兔和rhPA/GH双转基因兔 rhPA单转基因兔和rhPA/GH双转基因兔 乳清中的rhPA的表达量。

②分析实验结果

样本	供体兔a	供体兔b		供体兔c
rhPA表达水平（μg•mL-1）	42.2	42.8		15.2
样本	双转基因兔a1	双转基因兔a2	双转基因兔b1	双转基因兔c1
rhPA表达水平（μg•mL-1）	432	444	636	248

（注：双转基因兔a1、2亲本来源为供体兔a,双转基因兔b1亲本来源为供体兔b,双转基因兔c1亲本来源为供体兔c）
实验结果表明，

rhPA/GH双转基因兔乳腺表达rhPA水平明显高于rhPA单转基因兔，GH可协同促进rhPA在转基因兔乳腺中的高效表达

rhPA/GH双转基因兔乳腺表达rhPA水平明显高于rhPA单转基因兔，GH可协同促进rhPA在转基因兔乳腺中的高效表达

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