甜蛋白是一种高甜度的特殊蛋白质，为了改善黄瓜的品质，科学家利用农杆菌转化法将一种甜蛋白基因成功导入黄瓜细胞，得到了转基因植株。图1、图2分别为甜蛋白基因编码链（仅示部分碱基）和Ti质粒的示意图，其中①～⑤表示不同位点。请回答问题：

（1）甜蛋白基因启动子序列和终止密码子的编码序列分别位于图1的

非编码区1

非编码区1

、

编码

编码

区。启动子的功能是

启动子可以被RNA 聚合酶识别并结合，开始转录合成mRNA

启动子可以被RNA 聚合酶识别并结合，开始转录合成mRNA

。
（2）通过PCR技术大量扩增甜蛋白基因的编码区序列，需要设计一对引物，则引物序列为

5′-TCTAGAGG-3′

5′-TCTAGAGG-3′

、

5'-CTCGAGAT-3'

5'-CTCGAGAT-3'

。
（3）下表为不同限制酶的作用位点，在构建甜蛋白基因表达载体时，应选用的限制酶是

XhoⅠ和XbaⅠ

XhoⅠ和XbaⅠ

。

限制酶	识别序列和切割位点
BamHⅠ	5′G↓GATCC3′
PstⅠ	5′C↓TGCAG3′
XhoⅠ	5′C↓TCGAG3′
XbaⅠ	5′T↓CTAGA3′

（4）科研人员对载体Ti质粒进行改造时，需要插入多个限制酶单一切点，应选择在图2中的位点

③

③

（填序号）处插入。
T-DNA的作用是将甜蛋白基因导入黄瓜细胞并

将甜蛋白基因整合到黄瓜的染色体上

将甜蛋白基因整合到黄瓜的染色体上

。
（5）构建好的表达载体需先转入

农杆菌的T-DNA

农杆菌的T-DNA

后再转化黄瓜细胞，转化后应在培养基中添加

潮霉素

潮霉素

，筛选转化成功的愈伤组织。经组织培养，获得A、B两个黄瓜品系并对其甜蛋白表达量进行测定，结果如图3。与品系A相比，品系B的甜蛋白表达量较低，最可能的原因是

品系B的甜蛋白基因的插入位点影响了甜蛋白基因的表达

品系B的甜蛋白基因的插入位点影响了甜蛋白基因的表达

。