下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：

限制酶	BamHⅠ	HindSⅢ	EcoRⅠ	SmaⅠ
识别序列及切割位点	G↓GATCC CCTAG↓G	A↓AGCTT TTCGA↓A	G↓AATTC CTTAA↓G	CCC↓GGG GGG↓CCC

（1）EcoRI断开的是

鸟嘌呤脱氧核苷酸

鸟嘌呤脱氧核苷酸

和 

腺嘌呤脱氧核苷酸

腺嘌呤脱氧核苷酸

 之间的

磷酸二酯键

磷酸二酯键

键。一个图1所示的质粒分子经SmaⅠ切割前后，分别含有

0，2

0，2

 个游离的磷酸基团。
（2）若对图中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性越

高

高

。
（3）用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用SrnaⅠ切割，原因是

会破坏质粒中的标记基因和外源DNA中的目的基因

会破坏质粒中的标记基因和外源DNA中的目的基因

。
（4）与只使用EcoR I相比较，使用BamHⅠ和HindⅢ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以实现

目的基因和质粒的定向连接

目的基因和质粒的定向连接

。BamHⅠ切割DNA后形成的是

黏性

黏性

末端，写出该末端

-CTAG或GATC-

-CTAG或GATC-

。
（5）重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了

鉴别和筛选含有目的基因的受体细胞

鉴别和筛选含有目的基因的受体细胞

。如果是四环素抗性基因，可以在培养基中加

四环素

四环素

来帮助实现该作用。
（6）为了从cDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因，将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体，然后在

四环素

四环素

的培养基中培养，以完成目的基因表达的初步检测。