一种天然蛋白t-PA能高效降解因血浆纤维蛋白凝聚而成的血栓，是心梗和脑血栓的急救药，但是心梗患者注射大剂量的t-PA会诱发颅内出血。研究证实，将t-PA蛋白第84位的半胱氨酸换成丝氨酸，能显著降低其诱发出血的副作用。据此，先对天然t-PA基因的碱基序列进行改造，然后再采取传统的基因工程方法表达该改造后的基因，可制造出性能优异的改良t-PA蛋白。如图表示相关的目的基因、载体及限制酶识别序列和切割位点，pCLY11为质粒，请回答下列问题：
（1）可以先提取细胞的 mRNAmRNA来合成总cDNA，再从cDNA文库中获取t-PA基因。通过改造t-PA基因制造出性能优异的改良t-PA蛋白的过程被称为 蛋白质蛋白质工程。
（2）若改造后的t-PA基因的黏性末端如上图所示，则需要选用限制酶 XmaⅠ和BglⅡXmaⅠ和BglⅡ切割质粒pCLY11，保证质粒与t-PA改良基因高效连接。再用DNA连接酶催化形成 磷酸二酯磷酸二酯键，构建重组质粒。
（3）以大肠杆菌作为受体细胞，在含新霉素的培养基中形成菌落的受体细胞并非都是目的菌株，原因是 导入未连目的基因的质粒的大肠杆菌也可以在这种培养基上生长导入未连目的基因的质粒的大肠杆菌也可以在这种培养基上生长。成功获取能生产改良t-PA蛋白的工程菌株后，利用 液体液体（填“固体”或“液体”）培养基在发酵罐中进行大量生产。
（4）除了用工程菌株，还可以用下列方法从转基因牛乳汁中获得改良t-PA蛋白：
过程②常用的方法是 显微注射法显微注射法；在过程④前需要取囊胚的 滋养层滋养层细胞做DNA分析进行性别鉴定；为了保证t-PA改良基因能在乳腺细胞中表达，构建基因表达载体需要将其与 乳腺蛋白基因的启动子乳腺蛋白基因的启动子等调控元件重组在一起。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】mRNA；蛋白质；XmaⅠ和BglⅡ；磷酸二酯；导入未连目的基因的质粒的大肠杆菌也可以在这种培养基上生长；液体；显微注射法；滋养层；乳腺蛋白基因的启动子
【解答】
【点评】
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发布：2024/4/20 14:35:0组卷：22引用：2难度：0.4
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1．下列有关基因工程技术和蛋白质工程技术叙述正确的是（ ）
发布：2025/1/5 8:0:1组卷：6引用：1难度：0.7 -
2．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6 -
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