镍是一种重金属，由于在工业上被大量使用及废料的大量排放而对环境产生了严重的污染。科研人员发现重组质粒pSUNI含有nixA基因，该基因编码一种高特异性的N+转运蛋白，重组质粒pGPMT3带有编码金属硫蛋白基因（tmG），金属硫蛋白（TM）可高容量地结合重金属离子，又可在细胞内消除重金属离子对细胞本身的毒害作用。科学家利用基因工程培育出能够富集Ni²⁺的“超级细菌”一大肠杆菌JM1O9，用来净化工业废水，治理环境污染。回答下列问题：
（1）构建重组质粒pSUNI、pGPMT3所需要的两种酶是

限制酶、DNA连接酶

限制酶、DNA连接酶

，培育“超级细菌”——大肠杆菌JM109所需的目的基因是

nixA、tmG

nixA、tmG

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（2）科研人员用

Ca²⁺

Ca²⁺

处理大肠杆菌，使细胞处于一种能吸收周围环境DNA的生理状态，再将重组质粒导入受体细胞。在大肠杆菌JM109细胞内，nixA基因表达产物分布在大肠杆菌的

细胞膜

细胞膜

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（3）科研人员为检测大肠杆菌JM109富集Ni²⁺的效果，在适宜的条件下培养原JM109、JM1O9+pSUNI，JM109+PSUNI+pGPMT3，在含有一定浓度Ni²⁺的培养液中培养，检测大肠杆菌菌体的数量和菌体中Ni²⁺的含量，实验结果如图所示。

该实验原JM109组的作用是

对照

对照

，JM1O9+pSUNI组的大肠杆菌数量最少的原因是

特异性的Ni²⁺转运蛋白将较多Ni²⁺转运入细胞，且没有金属硫蛋白（TM）消除Ni²⁺对自身细胞的毒害作用

特异性的Ni²⁺转运蛋白将较多Ni²⁺转运入细胞，且没有金属硫蛋白（TM）消除Ni²⁺对自身细胞的毒害作用

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（4）简要写出实验思路，探究大肠杆菌JM109富集Ni²⁺受废水pH的影响。实验思路：

配制一系列含Ni²⁺的不同pH培养液培养大肠杆菌JM109，一段时间后检测各组培养液中Ni²⁺含量的变化

配制一系列含Ni²⁺的不同pH培养液培养大肠杆菌JM109，一段时间后检测各组培养液中Ni²⁺含量的变化

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