pUC质粒载体如图所示，目的基因插入到Amp′或LacZ′中均会导致相应基因失活。筛选含有重组质粒的大肠杆菌可采用蓝白斑法，机制如下：LacZ′基因在IPTG诱导下表达的α-肽可与大肠杆菌自身编码的β-肽互补从而产生有活性的β-半乳糖苷酶，该酶能够水解X-gal使菌落呈蓝色，否则呈白色。某科研人员利用LacZ′基因与目的基因构建基因表达载体A后再转化大肠杆菌。回答下列问题：
说明：1.Amp′表示氨苄青霉素抗性基因
LacZ′基因表示β-半乳糖苷酶基因部分DNA序列；
2.SmaI与MstI识别序列和切割位点不同
（1）1967年科学家发现质粒能自我复制，并可以在细菌细胞间转移，这一发现为基因转移基因转移找到了一种运载工具。
（2）目的基因主要是指编码蛋白质的基因，也可以是一些具有调控作用调控作用的因子。若需快速得到大量目的基因，可采用PCR技术，该技术一般由变性→复性（退火）→延伸变性→复性（退火）→延伸三个基本反应步骤构成。
（3）作为基因表达载体除了需要有复制原点、标记基因、目的基因外，还需要具有启动子和终止子启动子和终止子。为了避免目的基因的自身环化，写出构建基因表达载体A的主要实验步骤：用MstI和BgII双酶切pUC质粒载体，与用MstI和BgII双酶切获得的目的基因混合，加入DNA连接酶进行连接反应用MstI和BgII双酶切pUC质粒载体，与用MstI和BgII双酶切获得的目的基因混合，加入DNA连接酶进行连接反应。
（4）转化后的大肠杆菌需放在含有氨苄青霉素、IPTG和X-galIPTG和X-gal的培养基中进行培养，筛选出白色的菌落即为含有重组质粒（基因表达载体A）重组质粒（基因表达载体A）的大肠杆菌。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】基因转移；调控作用；变性→复性（退火）→延伸；启动子和终止子；用MstI和BgII双酶切pUC质粒载体，与用MstI和BgII双酶切获得的目的基因混合，加入DNA连接酶进行连接反应；IPTG和X-gal；重组质粒（基因表达载体A）
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：24引用：1难度：0.6
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（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
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