研究人员利用绿色荧光蛋白基因（sGFP）转染大丽轮枝菌，培育表达绿色荧光蛋白的转基因菌株。主要过程如图（图中a链和b链分别是相应基因转录的模板链）。
（1）第①步：PCR扩增sGFP基因。PCR扩增sGFP的原理是 DNA双链复制DNA双链复制；图中b链的碱基序列黏性末端（5′→3′）为 AGCTAGCT。
（2）第②步：目的基因与运载体结合。②需要的工具酶是 DNA连接酶DNA连接酶，此时目的基因插入到 构巢曲霉构巢曲霉启动子之后，目的是 保证sGFP基因可以在大丽轮枝菌细胞中表达保证sGFP基因可以在大丽轮枝菌细胞中表达。
（3）第③步：目的基因导入大丽轮枝菌。该过程需要先将目的基因导入农杆菌，而后将转化后的农杆菌放置于含有 潮霉素潮霉素的培养基上，筛选出含有目的基因的农杆菌。将导入重组质粒的农杆菌加入大丽轮枝菌的孢子细胞悬液中，在适宜条件下完成转染后利用滤膜过滤得到孢子细胞，再在真菌培养基上培养获得菌落，最终通过检测 荧光强度荧光强度筛选出绿色荧光蛋白旺盛表达的大丽轮枝菌。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】DNA双链复制；AGCT；DNA连接酶；构巢曲霉；保证sGFP基因可以在大丽轮枝菌细胞中表达；潮霉素；荧光强度
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：24引用：1难度：0.6
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（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6
