1965年中国科学家人工合成了具有生物活性的结晶牛胰岛素，摘取了人工合成蛋白质的桂冠。人胰岛素基因表达的最初产物是一条肽链构成的前胰岛素原，经图1所示的过程形成具生物活性的胰岛素。此后科学家又提出了利用基因工程改造大肠杆菌生产人胰岛素的两种方法：AB法是根据胰岛素A、B两条肽链的氨基酸序列人工合成两种DNA片段，利用工程菌分别合成两条肽链后将其混合自然形成胰岛素；BCA法是利用胰岛B细胞中的mRNA得到胰岛素基因，表达出胰岛素原后再用特定酶切掉C肽段。这两种方法使用同一种质粒作为载体。请据如图分析并回答下列问题：

（1）由于密码子具有

简并性

简并性

，AB法中人工合成的两种DNA片段均有多种可能的序列。

AB和BCA

AB和BCA

（填“AB”、“BCA”或“AB和BCA”）法获取的目的基因中不含人胰岛素基因启动子。
（2）图2是利用基因工程生产人胰岛素过程中使用的质粒及目的基因的部分结构。为使目的基因与载体正确连接，在设计PCR引物时可添加限制酶

XhoⅠ和MunⅠ

XhoⅠ和MunⅠ

的识别序列。通过上述方法获得人的胰岛素基因后，需要通过PCR技术进行扩增，已知胰岛素基因左端①处的碱基序列为-CCTTTCAGCTCA-，则其中一种引物设计的序列是5′

-CTCGAGCCTTTCAGCTCA-

-CTCGAGCCTTTCAGCTCA-

3′。
（3）β-半乳糖苷酶可以分解无色的X-gal产生蓝色物质使菌落呈现蓝色，否则菌落为白色。经

钙离子处理法

钙离子处理法

（处理方法），大肠杆菌与重组质粒混合培养一段时间后，将大肠杆菌接种到添加了氨苄青霉素和X-gal的培养基上筛选出

白

白

色的菌落即为工程菌种。
（4）科学家利用蛋白质工程技术，研制出了赖脯胰岛素，与天然胰岛素相比，其皮下注射后易吸收、起效快。获得赖脯胰岛素基因的途径是：从预期的蛋白质功能出发→

设计预期的蛋白质结构

设计预期的蛋白质结构

→推测应有的氨基酸序列→找到相对应的脱氧核苷酸序列。