玉米是我国重要的粮食作物和饲料来源，低温会影响玉米的产量和品质。研究者将从微生物中获得的CSP（冷激蛋白）基因与玉米基因的ubi启动子相连后构建基因表达载体，并将其导入玉米细胞中，获得了具有低温耐受性的玉米植株，过程如图1所示。
（1）研究者提取玉米的DNA，利用PCR技术将ubi启动子扩增出来。该过程需设计合适的引物，引物设计时需已知ubi两端的一段序列ubi两端的一段序列，为便于进行后续操作还在引物中添加了限制酶的识别序列。在反应体系内，至少需33次扩增才能获得所需的ubi启动子。
（2）图1所示的流程图中，过程①需限制酶和DNA连接酶限制酶和DNA连接酶的催化，获得的ubi-CSP基因在构建基因表达载体时，在Ti质粒上的插入部位为T-DNA内部（且不破坏hpt）T-DNA内部（且不破坏hpt）。过程②需要用CaCl2溶液处理农杆菌，其目的是获得感受态细胞获得感受态细胞。过程③完成后，将玉米愈伤组织转入含潮霉素潮霉素的培养基中进行筛选，筛选后的愈伤组织再经培育获得转基因玉米。
（3）研究者分别提取了野生型玉米及5株转基因玉米的染色体DNA，用限制酶处理后进行电泳。电泳后的DNA与基因探针进行杂交，到图2所示放射性检测结果，该基因探针应为含放射性同位素标记的CSP基因含放射性同位素标记的CSP基因片段，实验结果表明除植株3外，其他4株转基因玉米中CSP基因均已整合到玉米染色体基因组中除植株3外，其他4株转基因玉米中CSP基因均已整合到玉米染色体基因组中。
（4）在个体水平上对转基因玉米植株进行低温耐受性低温耐受性实验，可检测CSP基因是否已在玉米中表达。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】ubi两端的一段序列；3；限制酶和DNA连接酶；T-DNA内部（且不破坏hpt）；获得感受态细胞；潮霉素；含放射性同位素标记的CSP基因；除植株3外，其他4株转基因玉米中CSP基因均已整合到玉米染色体基因组中；低温耐受性
【解答】
【点评】
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发布：2024/4/20 14:35:0组卷：22引用：3难度：0.6
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1．下列有关基因工程技术和蛋白质工程技术叙述正确的是（ ）
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2．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6 -
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