为了研究视神经病变诱导基因（OPTN）的分子机制，科研人员用OPTN基因的部分DNA片段构建表达载体，导入细胞后转录出的RNA会抑制细胞中OPTN蛋白的合成。实验中使用的DNA片段和载体上限制酶的识别序列如下：
| 限制酶 | BglⅡ | BamHⅠ | HindⅢ | XhoⅠ |
| 识别序列和切割位点 | A↓GATCT TCTAG↑A |
G↓GATCC CCTAG↑G |
A↓AGCTT TTCGA↑A |
G↓TCGAG GAGCT↑C |
（1）应选用BamHⅠ和HindⅢ切割载体质粒，理由是
目的基因片段和质粒上均含有HindⅢ的酶切位点；BamHⅠ与BglⅠ处理产生的黏性末端相同；BamHⅠ和HindⅢ处理质粒后能保证目的基因插入质粒的启动子和终止子之间
目的基因片段和质粒上均含有HindⅢ的酶切位点；BamHⅠ与BglⅠ处理产生的黏性末端相同；BamHⅠ和HindⅢ处理质粒后能保证目的基因插入质粒的启动子和终止子之间
。（2）重组质粒上
无
无
（填“有”或“无”）BamHⅠ的识别序列，因此可通过酶切法鉴定质粒是否重组成功，方法如下：用BamHⅠ和XhoⅠ两种限制酶处理质粒，未重组的质粒将产生2
2
种片段，重组的质粒将产生1
1
种片段。（3）重组质粒导入细胞后，能抑制细胞中OPTN蛋白合成的原因是
重组质粒中OPTN基因部分片段转录产生的mRNA与细胞中指导OPTN蛋白合成的mRNA互补结合，阻碍了翻译过程的进行
重组质粒中OPTN基因部分片段转录产生的mRNA与细胞中指导OPTN蛋白合成的mRNA互补结合，阻碍了翻译过程的进行
。（4）要证明导入重组质粒的细胞中OPTN基因的表达受到抑制，需要设置
导入未重组质粒（和未导入质粒）的细胞
导入未重组质粒（和未导入质粒）的细胞
作为对照组。通常采用抗原-抗体杂交
抗原-抗体杂交
法检测细胞中OPTN蛋白的表达水平。【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】目的基因片段和质粒上均含有HindⅢ的酶切位点；BamHⅠ与BglⅠ处理产生的黏性末端相同；BamHⅠ和HindⅢ处理质粒后能保证目的基因插入质粒的启动子和终止子之间；无；2；1；重组质粒中OPTN基因部分片段转录产生的mRNA与细胞中指导OPTN蛋白合成的mRNA互补结合，阻碍了翻译过程的进行；导入未重组质粒（和未导入质粒）的细胞；抗原-抗体杂交
【解答】
【点评】
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发布：2024/4/20 14:35:0组卷：10引用：1难度：0.7
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