苯丙酮尿症是一种单基因遗传病，由于PKU某因突变导致患者尿液中含有大量苯丙酮酸。基因定点整合可替换特定某因用于该病治疗，即将正常PKU基因定点整合到PKU基因突变的小鼠胚胎干细胞的染色体DNA上，替换突变基因。简要过程如图所示。请回答下列问题：
注：图中neoR为新霉素抗性基因，HB1和HB2为小鼠胚胎干细胞染色体DNA上突变的PKU基因两侧的一段DNA序列。
（1）构建重组载体时，需要根据HB1和HB2的碱基HB1和HB2的碱基序列分别合成HB1′和HB2′，在二者之间除了插入正常的PKU基因和neoR基因以外，还必须含有启动子、终止子启动子、终止子。此过程常用的工具酶有限制酶、DNA连接酶限制酶、DNA连接酶，neoR基因的作用是鉴定与筛选含有正常PKU基因的胚胎干细胞鉴定与筛选含有正常PKU基因的胚胎干细胞。
（2）可用显微注射显微注射技术将重组载体导入小鼠胚胎干细胞，诱导相应区域互换，完成胚胎干细胞的基因改造。胚胎干细胞的特点有能大量增殖；具有发育的全能性；能大量增殖；具有发育的全能性；、体积小、细胞核大、核仁明显；在体外培养条件下，可以增殖而不发生分化体积小、细胞核大、核仁明显；在体外培养条件下，可以增殖而不发生分化（答出两点即可）。
（3）现用完成基因改造后的胚胎干细胞进行个体生物学水平鉴定，写出鉴定思路、结果及结论：将该胚胎干细胞培育成小鼠，检测小鼠尿液中苯丙酮酸含量，若小鼠尿液中不含大量苯丙酮酸，说明PKU基因成功表达，基因治疗成功，反之，则不成功将该胚胎干细胞培育成小鼠，检测小鼠尿液中苯丙酮酸含量，若小鼠尿液中不含大量苯丙酮酸，说明PKU基因成功表达，基因治疗成功，反之，则不成功。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】HB1和HB2的碱基；启动子、终止子；限制酶、DNA连接酶；鉴定与筛选含有正常PKU基因的胚胎干细胞；显微注射；能大量增殖；具有发育的全能性；；体积小、细胞核大、核仁明显；在体外培养条件下，可以增殖而不发生分化；将该胚胎干细胞培育成小鼠，检测小鼠尿液中苯丙酮酸含量，若小鼠尿液中不含大量苯丙酮酸，说明PKU基因成功表达，基因治疗成功，反之，则不成功
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：5引用：1难度：0.7
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（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
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（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6
