为培育转固氮基因的小麦新品种，科研人员利用土壤农杆菌的Ti质粒和普通质粒按如图构建了双元载体系统（Ti辅助质粒和T-DNA给体质粒），图中vir基因编码产物能激活T-DNA转移，ori为复制原点，tmr和tms为致瘤基因，LB和RB为T-DNA两端的重复序列，kan为卡那霉素抗性基因，ter为四环素抗性基因。如表是几种限制酶识别序列及切割位点。请回答下列问题：
| 限制酶 | EcoRⅠ | BamHⅠ | Sau3AⅠ | BclⅠ | SmaⅠ | XmaⅠ |
| 识别序列及切割位点 | -G↓AATTC- | -G↓GATCC- | -↓GATC- | -T↓GATCA- | -CCC↓GGG- | -C↓CCGGG- |
（1）研究发现T-DNA的RB序列相当保守，是由于该序列的突变类型在
自然选择
自然选择
过程中被淘汰。（2）T-DNA转移至植物细胞可使植物患“肿瘤”，研究发现“肿瘤”的发生与植物激素有关，据此推测T-DNA中致瘤基因tmr、tms可能与
生长素、细胞分裂素
生长素、细胞分裂素
等植物激素的合成有关。（3）为防止植物形成“肿瘤”，研究人员按如图构建了双元载体系统。图中过程①需先用限制酶
SmaⅠ和BamHⅠ
SmaⅠ和BamHⅠ
处理Ti质粒以去除致瘤基因，再用 T4DNA连接
T4DNA连接
酶将经过处理的固氮基因接入Ti质粒，以构建重组质粒；过程②用限制酶 EcoRⅠ
EcoRⅠ
处理重组质粒，获得含vir基因的DNA片段和含固氮基因的T-DNA，再经过程③、④分别构建Ti辅助质粒和T-DNA给体质粒。图中过程④可以实现的原因是 A片段两端的粘性末端相同
A片段两端的粘性末端相同
。（4）科研人员用限制酶EcoRⅠ和Sau3AⅠ处理T-DNA给体质粒，完全酶切后可以得到含
3
3
条带的凝胶电泳图谱。（5）将构建的Ti辅助质粒和T﹣DNA给体质粒导入通过
感受态细胞法（或 Ca2+处理）
感受态细胞法（或 Ca2+处理）
方法处理的土壤农杆菌内，选择在含有 卡那霉素
卡那霉素
的培养基上能形成菌落的土壤农杆菌去感染小麦细胞。该过程中T-DNA给体质粒并不含有vir基因，但仍能将转化成功的原因是 Ti辅助质粒含有vir基因，其编码的产物能促进T-DNA给体质粒中的T-DNA转化成功
Ti辅助质粒含有vir基因，其编码的产物能促进T-DNA给体质粒中的T-DNA转化成功
。（6）种植转基因固氮小麦，在环境保护上的重要意义有
减少氮肥的使用，减轻环境污染
减少氮肥的使用，减轻环境污染
。（答出一点即可）【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】自然选择；生长素、细胞分裂素；SmaⅠ和BamHⅠ；T4DNA连接；EcoRⅠ；A片段两端的粘性末端相同；3；感受态细胞法（或 Ca2+处理）；卡那霉素；Ti辅助质粒含有vir基因，其编码的产物能促进T-DNA给体质粒中的T-DNA转化成功；减少氮肥的使用，减轻环境污染
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：15引用：1难度：0.6
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（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6
