19世纪末，巴斯德开创了第一次疫苗革命，其特点是接种灭活或减毒的病原微生物。20世纪70年代开始，现代生物技术的迅猛发展开创了第二次疫苗革命，使疫苗的研制进入分子水平。图1是通过基因工程制备乙型肝炎表面抗原（HbsAg）从而获得乙肝疫苗的过程。
在图1步骤①和③中，需要用合适的限制酶切割乙肝表面抗原基因和质粒。现将乙肝表面抗原基因及质粒的部分限制酶的识别序列及位置表示为图2。质粒中的启动子是质粒中基因得以正常表达所必需的部分。LacZ基因合成某种酶，该酶能将无色染料X-gal变成蓝色，最终能在含无色染料X-gal的培养基上将含该基因的菌落染成蓝色。
| 限制酶 | EcoRⅠ | BclⅠ | BamHⅠ | HindⅢ |
| 识别序列及切割位点 | 5'-G↓AATTC-3' | 5'-T↓GATCA-3' | 5'-G↓GATCC-3' | 5'-A↓AGCTT-3' |
无内含子、启动子、终止子等序列
无内含子、启动子、终止子等序列
，构建cDNA文库第一步需要 逆转录
逆转录
酶。（2）为了避免自身环化及便于筛选，切割质粒选用的限制酶是
BamHⅠ和HindⅢ
BamHⅠ和HindⅢ
，切割乙肝表面抗原基因选用的限制酶是 BclⅠ和HindⅢ
BclⅠ和HindⅢ
。（3）为筛选含有乙肝表面抗原的大肠杆菌细胞，需要将导入操作之后的大肠杆菌接种到含
氨苄青霉素和无色染料X-gal
氨苄青霉素和无色染料X-gal
的固体牛肉膏蛋白胨培养基上，挑选 白色/未被染成蓝色
白色/未被染成蓝色
的菌落纯化培养。（4）在图1步骤④中，使用的基因工程工具酶是
DNA连接酶
DNA连接酶
。在一个乙肝表面抗原基因与一个质粒重组的过程中（图1步骤④），游离的磷酸基团数目减少 4
4
个。（5）若运用PCR技术检测乙肝表面抗原基因是否导入，需根据目的基因的序列设计
PCR引物
PCR引物
，利用待检DNA为模板进行PCR。PCR过程包括多次循环，每个循环分为3个步骤：①变性
变性
②退火/复性
退火/复性
③延伸。（6）下列有关限制酶的叙述，错误的是
B
B
。A.限制酶催化的反应类型是水解反应
B.限制酶破坏的是氢键
C.一种限制酶只能识别双链DNA中某种特定的脱氧核苷酸序列
D.EcoRⅠ与HindⅢ相比较，EcoRⅠ酶切后的DNA片段较容易分离
（7）基因工程的诞生，带动了现代生物技术的迅猛发展，下列关于基因工程的叙述，正确的是
B
B
。A.以蛋白质的氨基酸序列为依据合成的目的基因与原基因的碱基序列相同
B.基因工程可以定向改造生物的性状
C.基因工程经常以抗生素的抗性基因为目的基因
D.限制性核酸内切酶一般能识别多种核苷酸序列
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】无内含子、启动子、终止子等序列；逆转录；BamHⅠ和HindⅢ；BclⅠ和HindⅢ；氨苄青霉素和无色染料X-gal；白色/未被染成蓝色；DNA连接酶；4；PCR引物；变性；退火/复性；B；B
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：9引用：1难度：0.6
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（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6
