如图是将乙肝病毒表面主蛋白基因HBsAg导入巴斯德毕赤酵母菌生产乙肝疫苗的过程图。巴斯德毕赤酵母菌是一种甲基营养型酵母，能将甲醇作为其唯一碳源。该酵母菌体内无天然质粒，科学家改造出了图1所示的pPIC9K质粒用作载体，其与目的基因形成的重组质粒经酶切后可以与酵母菌染色体发生同源重组，将目的基因整合于染色体中以实现表达。已知当甲醇作为唯一碳源时，该酵母菌中AOX1基因受到诱导而表达（5'AOX1和3'AOX1（TT）分别是基因AOX1的启动子和终止子）。请分析回答：
（1）为实现HBsAg基因和pPIC9K质粒重组，应该选择SnaBI AvrⅡSnaBI AvrⅡ切割质粒，并在HBsAg基因两侧的A和B位置接上相应的限制酶识别序列相应的限制酶识别序列，这样设计的优点是确保定向连接（避免质粒和目的基因自身环化及自连）确保定向连接（避免质粒和目的基因自身环化及自连）。
（2）酶切获取HBsAg基因后，需用DNA连接酶DNA连接酶将其连接到pPIC9K质粒上，形成重组质粒，并将其导入大肠杆菌以获取大量重组质粒大量重组质粒。
（3）步骤3中应选用限制酶BglⅡBglⅡ来切割重组质粒以获得重组DNA，然后再将其导入巴斯德毕赤酵母菌细胞。
（4）为了确认巴斯德毕赤酵母菌转化是否成功，在培养基中应该加入卡拉霉素卡拉霉素以便筛选：若要检测转化后的细胞中是否含有HBsAg基因转录产物，可以用分子杂交分子杂交方法进行检测。
（5）转化的酵母菌在培养基上培养一段时间后，需要向其中加入甲醇甲醇以维持其生活，同时诱导HBsAg基因表达。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】SnaBI AvrⅡ；相应的限制酶识别序列；确保定向连接（避免质粒和目的基因自身环化及自连）；DNA连接酶；大量重组质粒；BglⅡ；卡拉霉素；分子杂交；甲醇
【解答】
【点评】
声明：本试题解析著作权属菁优网所有，未经书面同意，不得复制发布。
发布：2024/6/27 10:35:59组卷：25引用：4难度：0.5
相似题
-
1．下列有关基因工程技术和蛋白质工程技术叙述正确的是（ ）
发布：2025/1/5 8:0:1组卷：6引用：1难度：0.7 -
2．下列有关基因工程的叙述，正确的是（ ）
发布：2024/12/31 5:0:5组卷：3引用：2难度：0.7 -
3．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6
