某研究小组开展“猪血浆某白蛋白的提取及分子量测定”研究，请协助完成有关问题。
材料用具：新鲜猪血、离心机、透析袋电泳仪等。
化学试剂：pH为7.4的缓冲液、柠檬酸钠、奈氏试剂（与NH₄⁺反应出现黄色或红棕色沉淀）、饱和（NH₄）₂SO₄溶液、生理盐水等。
实验步骤：
（1）样品获取：向新鲜猪血中加入

（适量的）柠檬酸钠

（适量的）柠檬酸钠

，低速离心后取

上层

上层

（填“上层”或“下层”）血浆。
（2）盐析法粗提蛋白质：
①向血浆中加入一定体积的饱和（NH₄）₂SO₄溶液，使（NH₄）₂SO₄的浓度达到50%，充分混合后静置、离心，取沉淀物。
②向沉淀物中加入适量生理盐水使之溶解，再向其中加入一定体积的饱和（NH₄）₂SO₄溶液，使（NH₄）₂SO₄的浓度达到33%，充分混合后静置、离心，取沉淀物。
③重复步骤①、②2～3次，最后用生理盐水将沉淀溶解即得粗提品。盐析粗提“血浆某白蛋白”的主要原理是

该血浆白蛋白在50%和33%的 溶液中溶解度低

该血浆白蛋白在50%和33%的 溶液中溶解度低

，重复步骤①、②的主要目的是

除去更多的杂蛋白

除去更多的杂蛋白

。
（3）透析除盐：将粗提品装入透析袋，以pH为7.4的缓冲液作透析液，每隔4h更换一次透析液，每次更换前利用奈氏试剂检测透析液中NH₄⁺的量。利用缓冲液作透析液的目的是

避免因pH变化对蛋白质结构造成破坏（或抵制酸碱pH变化对溶液pH的影响，维持pH不变）

避免因pH变化对蛋白质结构造成破坏（或抵制酸碱pH变化对溶液pH的影响，维持pH不变）

。检测中，若观察到透析液

不出现黄色或红棕色沉淀

不出现黄色或红棕色沉淀

时，即可终止透析。
（4）凝胶色谱法分离：透析后的样品经凝胶柱洗脱，获得纯净血浆某白蛋白样品。在凝胶柱中，相对分子质量较

大

大

的蛋白质移动速度较快。
（5）分子量测定：化学物质SDS能使蛋白质变性，解聚成单条肽链。在聚丙烯酰胺凝胶电泳中加入一定量的SDS，电泳迁移率完全取决于肽链的分子大小。如图为本实验中用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定血浆某白蛋白的结果。根据电泳结果，某同学得出“提取的血浆某白蛋白有两条肽链”的结论，这种说法可靠吗？理由是

不可靠，只能得出提取的血浆某白蛋白含有两种大小不同的肽链，不一定是两条

不可靠，只能得出提取的血浆某白蛋白含有两种大小不同的肽链，不一定是两条

。