抗凝血酶Ⅲ蛋白是一种血浆糖蛋白，临床上主要用于血液性疾病的治疗。凝乳酶是奶酪生产中的关键性酶。下列是生产这两种酶的相关思路，请回答下列问题：
（1）图1为通过培育转基因奶牛获得抗凝血酶Ⅲ蛋白的流程。
①图中过程a指的是利用显微注射显微注射法将抗凝血酶Ⅲ蛋白基因导入受精卵。受体细胞不选用体细胞的理由是动物体细胞的全能型一般不能表现出来动物体细胞的全能型一般不能表现出来。
②b为早期胚胎培养和胚胎移植，在胚胎移植前，需进行性别鉴定性别鉴定，目的是确定要培育的个体能产牛奶。
③可采用抗原-抗体杂交法来鉴定转基因牛奶中是否含有抗凝血酶Ⅲ蛋白。该方法需要使用抗凝血酶Ⅲ蛋白的单克隆抗体，请写出制备该抗体的实验思路向小鼠体内注射现成的（标准的/纯化后的）抗凝血酶Ⅲ蛋白；提取免疫小鼠的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，经多次筛选获得能产生特异性抗体的杂交瘤细胞；对杂交瘤细胞扩增培养获取大量的单克隆抗体向小鼠体内注射现成的（标准的/纯化后的）抗凝血酶Ⅲ蛋白；提取免疫小鼠的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，经多次筛选获得能产生特异性抗体的杂交瘤细胞；对杂交瘤细胞扩增培养获取大量的单克隆抗体。
（2）从牛胃液中分离得到的凝乳酶以其催化能力强而被广泛应用，研究人员运用基因工程技术，将编码该酶的基因转移到了微生物细胞中。
①从牛胃细胞中提取mRNA，再通过逆转录逆转录形成cDNA．以此cDNA为模板通过PCR扩增目的基因，有时需要在引物的5'端设计限制酶限制酶（填“限制酶”/“DNA连接酶”/“RNA聚合酶”）的识别序列，以便构建重组DNA分子。
②为提高重组DNA分子的比例，在构建重组DNA分子（如图2所示）时最好选用BamHⅠ和PstⅠBamHⅠ和PstⅠ作限制酶。
③经研究发现，如果将该凝乳酶的第20位和24位氨基酸变为半胱氨酸，则其催化能力将提高2倍。现已知通过蛋白质工程可生产高效凝乳酶，应直接改造的是凝乳酶基因凝乳酶基因（凝乳酶蛋白/凝乳酶mRNA/凝乳酶基因）。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】显微注射；动物体细胞的全能型一般不能表现出来；性别鉴定；向小鼠体内注射现成的（标准的/纯化后的）抗凝血酶Ⅲ蛋白；提取免疫小鼠的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，经多次筛选获得能产生特异性抗体的杂交瘤细胞；对杂交瘤细胞扩增培养获取大量的单克隆抗体；逆转录；限制酶；BamHⅠ和PstⅠ；凝乳酶基因
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：13引用：1难度：0.6
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2．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6 -
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