科研小组利用基因工程技术将“抗虫基因”转入棉花细胞成功培育出抗虫棉，该技术所用的含“抗虫基因”的DNA与质粒上相关限制酶的酶切位点分别如图1、图2所示（不同限制酶的识别序列和酶切位点：BamHⅠ5'-G↓GATCC-3'，BclⅠ5'-T↓GATCA-3'，Sau3AⅠ5'-↓GATC-3'，HindⅢ5'-A↓AGCTT-3'）。请分析并回答以下问题：
（1）将抗虫基因转入棉花细胞前，可以通过PCR扩增获得大量抗虫基因，PCR扩增抗虫基因的前提是要测定该基因两端部分核苷酸序列，目的是 便于合成引物便于合成引物。PCR每次循环都包括变性、复性复性和延伸三步。
（2）由图1和图2分析可知，研究人员应选择 HindIII和Sau3AIHindIII和Sau3AI限制酶处理含抗虫基因的DNA片段，在处理质粒的时候应选择 HindIII和BamHIHindIII和BamHI限制酶。质粒DNA中含有的启动子是 RNA聚合酶RNA聚合酶识别并结合的位点。
（3）蛋白酶抑制剂基因也是一种抗虫基因，某研究团队将胰蛋白酶抑制剂（NaPI）和胰凝乳蛋白酶抑制剂（StPin1A）的基因单独或共同转化，获得转基因植株。
①将抗虫基因转入植物体内时，除了采用我国科学家独创的花粉管通道法，还可以采用 农杆菌转化农杆菌转化法，使用该方法时，应将抗虫基因插入到质粒的 T-DNAT-DNA区域。
②标记基因可用于检测目的基因是否导入，由图2可知，应选含有 X抗生素X抗生素的培养基筛选含有重组质粒的细胞。
③图3为将胰蛋白酶抑制剂（NaPI）和胰凝乳蛋白酶抑制剂（StPin1A）的基因单独或共同转化的实验结果，据结果分析，NaPINaPI（选填“NaPI”或“Stpin1A”或“NaPI+Stpin1A”）转基因棉花的抗虫效果最佳，得出该结论的原因是 饲喂NaPI转基因植物的虫体质量较差，且每株棉铃虫数较最少饲喂NaPI转基因植物的虫体质量较差，且每株棉铃虫数较最少。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】便于合成引物；复性；HindIII和Sau3AI；HindIII和BamHI；RNA聚合酶；农杆菌转化；T-DNA；X抗生素；NaPI；饲喂NaPI转基因植物的虫体质量较差，且每株棉铃虫数较最少
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：4引用：1难度：0.6
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3．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6
