奶酪是一种被广泛食用的发酵奶制品。大多数奶酪的生产需要使用凝乳酶来凝聚固化奶中的蛋白质。科学家将编码牛凝乳酶的基因导入大肠杆菌的基因组中，再通过工业发酵批量生产凝乳酶。请回答下列问题：
（1）科学家们常用PCR技术扩增牛凝乳酶基因，该反应需要在一定的缓冲溶液中进行，还需要提供DNA模板、2种引物、dATP、dTTP、dCTP、dGTP和

耐高温的DNA聚合酶（Taq酶）

耐高温的DNA聚合酶（Taq酶）

等物质。
（2）在构建基因表达载体时，科学家们常选择双酶切（同时用两种限制酶切割含目的基因的DNA和质粒），与单一酶切相比，双酶切的优点是可以避免出现

目的基因与质粒任意连接（或目的基因与目的基因、质粒与质粒发生自身连接或自身（连接）环化等）

目的基因与质粒任意连接（或目的基因与目的基因、质粒与质粒发生自身连接或自身（连接）环化等）

。
（3）科学家们常用

Ca²⁺（或CaCl₂）

Ca²⁺（或CaCl₂）

处理大肠杆菌细胞，使其处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态，然后再将重组的基因表达载体导入其中。尝试推测科学家们确定转基因大肠杆菌是否产生牛凝乳酶的方法思路是

培养大肠杆菌，分离提纯其产生的蛋白质，并进行鉴定（抗原—抗体杂交反应）确定是否含有牛凝乳酶

培养大肠杆菌，分离提纯其产生的蛋白质，并进行鉴定（抗原—抗体杂交反应）确定是否含有牛凝乳酶

。
（4）筛选出转化成功的大肠杆菌后，科学家们常将其转入LB培养基中进行扩大培养，从物理性质上分该培养基属于

液体

液体

培养基，LB培养基应中含有

水、碳源、氮源、无机盐

水、碳源、氮源、无机盐

等四类基本营养物质。
（5）为确定转基因大肠杆菌的平均产酶能力，常需对转基因大肠杆菌的活菌进行计数，推测科学家最可能用到的计数方法是

稀释涂布平板法

稀释涂布平板法

。该计数方法也可用于微生物的分离，其分离微生物的原理是

通过（梯度）稀释将聚集的菌种分离（分散）成单个细胞，并在培养基上形成单个菌落

通过（梯度）稀释将聚集的菌种分离（分散）成单个细胞，并在培养基上形成单个菌落

。除上述方法外，科学家们还可以用

平板划线法

平板划线法

法分离获得高产大肠杆菌菌株。