研究人员从土壤中分离获得能分解纤维素的细菌A菌），从A菌中提取一种纤维素酶基因（CBHI，长度为1.4kbp）并进行PCR扩增，然后与高效表达载体pUT质粒（长度为11．bp）连接构建成重组质粒并导入A菌，从而获得分解纤维素能力更强的工程菌（B菌）。
| 限制酶 | 识别序列及酶切位点 |
| BglⅡ | A↓GATCT |
| BstEⅡ | G↓GTAACC |
| SacⅠ | G↓AGCTC |
| MspⅠ | G↓CGG |
| BamHⅠ | G↓GATCC |
（1）CBHⅡ基因两端需添加相关酶切位点才能与pUT质连接，因此在扩增CBHⅡ基因时，需要在两种引物上分别添加
AGATCT
AGATCT
序列和 GGTAACC
GGTAACC
序列。PCR中需要添加引物的原因是 使DNA聚合酶能够从引物的3’端开始连接脱氧核苷酸
使DNA聚合酶能够从引物的3’端开始连接脱氧核苷酸
。（2）为鉴定重组质粒是否构建成功，将重组质粒导入A菌，并将其接种在含
抗生素N
抗生素N
的培养基上培养，然后提取3个不同菌落的质粒分别进行双酶切验证将酶切片段和CHⅡ基因分别进行电泳，结果如图2所示。据此分析，菌落 2、3
2、3
中成功导入了重组质粒。完整的重组质粒应包括 启动子、终止子、目的基因、标记基因、复制原点
启动子、终止子、目的基因、标记基因、复制原点
（至少答出三点）。
（3）图3中B链为转录模板链，转录时mRNA自身的延伸方向为5′→3′。为了使CBHⅡ基因按照正确的方向与已被酶切的pUT质粒连接，图中酶切位点1和酶切位点2所对应的酶分别是
BglⅡ和 BstEⅡ
BglⅡ和 BstEⅡ
，用两种限制酶切割的目的是 防止发生自身环化，保证 CBHⅡ基因和pUT 质粒正确连接
防止发生自身环化，保证 CBHⅡ基因和pUT 质粒正确连接
。（4）为检测B菌的纤维素分解能力，将含有20%纤维素的培养基分为三组，一组接种B菌，一组不做处理，一组接种
A菌
A菌
，在相同条件下培养一段时间，测定培养基中纤维素含量，结果如图4所示，说明 B菌分解纤维素能力比A菌更强
B菌分解纤维素能力比A菌更强
。预期该工程菌在处理废弃物及保护环境方面可能的应用，举一个实例。 降解秸秆，减少秸秆燃烧带来的空气污染
降解秸秆，减少秸秆燃烧带来的空气污染
。【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】AGATCT；GGTAACC；使DNA聚合酶能够从引物的3’端开始连接脱氧核苷酸；抗生素N；2、3；启动子、终止子、目的基因、标记基因、复制原点；BglⅡ和 BstEⅡ；防止发生自身环化，保证 CBHⅡ基因和pUT 质粒正确连接；A菌；B菌分解纤维素能力比A菌更强；降解秸秆，减少秸秆燃烧带来的空气污染
【解答】
【点评】
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发布：2024/4/20 14:35:0组卷：16引用：1难度：0.6
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