研究发现，Ti质粒上的 vir 区对T-DNA的转移是必不可少的，但不一定与T-DNA连在一起。根据这一原理，研究人员开发了双元载体系统，包括微型 Ti质粒和辅助 Ti质粒（如图）。利用双元质粒，研究人员将抗草甘膦基因 cp4-epsps 导入大豆中，培育出抗除草剂（草甘膦）转基因大豆。cp4-epsps 基因来源于细菌，其表达产物需引导至叶绿体中才能起作用，回答下列问题：
（1）为将cp4-epsps基因导入大豆细胞的叶绿体，将其与叶绿体转运肽基因ctp融合，构建融合基因（下称cc 基因）。构建融合基因时需要的酶是 限制酶、DNA连接酶限制酶、DNA连接酶。
（2）微型Ti质粒和辅助Ti质粒均比野生 Ti质粒小得多，优点是 质粒小，易于转化（提高质粒的转化率）质粒小，易于转化（提高质粒的转化率）。微型Ti质粒和辅助Ti质粒均删除了生长素基因和细胞分裂素基因，这两个基因转染到水稻愈伤组织后不利于水稻愈伤组织的再分化，原因是 T-DNA中生长素基因和细胞分裂素基因在愈伤组织中表达，所产生的激素会影响愈伤组织的分化T-DNA中生长素基因和细胞分裂素基因在愈伤组织中表达，所产生的激素会影响愈伤组织的分化。
（3）构建cc基因表达载体时，应将 cc 基因导入 微型Ti质粒微型Ti质粒（填“微型 Ti质粒“或“辅助 Ti质粒“）；并转化到大肠杆菌中；转化后的大肠杆菌与含有另一种质粒的农杆菌混合，经温育得到含双元载体的农杆菌。对转化后的大肠杆菌进行筛选时，培养基中应加入 卡那霉素卡那霉素。
（4）在对转cp4-epsps 水稻进行检测时发现叶肉细胞内有epsps蛋白，但水稻却无草甘膦抗性，原因可能是 叶绿体转运肽异常，不能引导epsps蛋白进入叶绿体叶绿体转运肽异常，不能引导epsps蛋白进入叶绿体。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】限制酶、DNA连接酶；质粒小，易于转化（提高质粒的转化率）；T-DNA中生长素基因和细胞分裂素基因在愈伤组织中表达，所产生的激素会影响愈伤组织的分化；微型Ti质粒；卡那霉素；叶绿体转运肽异常，不能引导epsps蛋白进入叶绿体
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：17引用：1难度：0.7
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2．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
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