CRISPR-Cpf1敲除系统是Cpf1-crRNA复合体，利用crRNA引导Cpf1结合到靶DNA的特定序列上并切割双链DNA分子。利用此系统在基因特定部位切割，再通过同源重组作用去除靶基因，进一步利用质粒自身的温敏特性将质粒消除，从而完成基因敲除。为研究精氨酸代谢调控因子基因（argR基因）对精氨酸代谢的影响，科研人员利用上述技术敲除谷氨酸棒状杆菌argR基因，过程如图1。其中kanr是卡那霉素抗性基因，argR-HR1和argR-HR2是argR基因两侧的部分序列。请回答下列问题：
（1）①过程通过PCR获得argR-HR1和argR-HR2，该过程的原料是 4种游离的脱氧核苷酸（dNTP）4种游离的脱氧核苷酸（dNTP），所需的酶是 Taq酶Taq酶。
（2）②过程需要的酶是 限制性核酸内切酶、DNA连接酶限制性核酸内切酶、DNA连接酶，③过程应用 Ca2+（或CaCl2）Ca2+（或CaCl2）处理谷氨酸棒状杆菌使其能吸收质粒2。
（3）④过程经过 转录、翻译转录、翻译表达出了Cpf1，与DNA复制相比，⑤过程特有的碱基互补配对方式是 A-UA-U。
（4）⑥过程中Cpf1-crRNA复合体的作用有 识别DNA分子上特定的碱基序列，并进行切割识别DNA分子上特定的碱基序列，并进行切割。⑦过程在同源重组酶的作用下，谷氨酸棒状杆菌基因组中的 argRargR基因被敲除。
（5）由于质粒2的温敏特性，⑧过程在37℃条件下培养的目的是 消除质粒消除质粒。
（6）为了验证过程⑧后重组菌种的抗性，通过影印接种（A、B两个培养基中接种菌种的位置相同）培养，结果如图2，其中 能在A培养基上生长，不能在B培养基上生长的菌株能在A培养基上生长，不能在B培养基上生长的菌株是完成目的基因被敲除的菌株。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】4种游离的脱氧核苷酸（dNTP）；Taq酶；限制性核酸内切酶、DNA连接酶；Ca2+（或CaCl2）；转录、翻译；A-U；识别DNA分子上特定的碱基序列，并进行切割；argR；消除质粒；能在A培养基上生长，不能在B培养基上生长的菌株
【解答】
【点评】
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发布：2024/4/20 14:35:0组卷：7引用：2难度：0.7
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（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6
