p53基因是一种抑癌基因，在恶性肿瘤患者中突变率达50%以上。与人相比，大象体内含有多对p53基因，推测是其很少患肿瘤的主要原因。设计实验探究人p53基因在乳腺肿瘤细胞中的作用，回答下列问题：
（1）利用PCR技术扩增p53基因。首先根据p53基因的核苷酸序列，设计并合成引物引物，其能与变性p53基因单链结合，在耐高温的DNA聚合酶耐高温的DNA聚合酶催化作用下延伸，如此循环多次。
（2）p53基因表达载体的构建。如图所示，表达载体上除了标注的DNA片段外，在p53基因上游还必须拥有的DNA片段（箭头所示）是启动子启动子，其作用机理是RNA 聚合酶识别、结合和开始转录的序列RNA 聚合酶识别、结合和开始转录的序列。外源p53基因插入载体中至少需要两种工具酶，包括准确切割DNA的限制性核酸内切酶和将双链DNA片段“缝合”起来的DNA连接酶DNA连接酶。
（3）乳腺肿瘤细胞培养。完成伦理学审查和病人知情同意书签署后，将患者乳腺肿瘤组织块剪碎，制成细胞悬液在适宜的条件下培养。培养环境中所需的主要气体包括细胞代谢必需的O2O2和维持培养液pH值的CO2CO2。保持培养环境处于无菌无毒条件的操作包括培养液灭菌、加抗生素抑制细菌生长培养液灭菌、加抗生素抑制细菌生长（答出两点即可）。
（4）检测p53基因表达对乳腺肿瘤细胞增殖的影响。分别将空载体和p53表达载体转入肿瘤细胞培养，采用特殊方法检测细胞增殖情况，并从培养的肿瘤细胞中提取蛋白质，用相应的抗体抗体进行杂交，检测p53基因翻译成蛋白质的情况，探索杂交带强度与细胞增殖率相关性。
【答案】引物；耐高温的DNA聚合酶；启动子；RNA 聚合酶识别、结合和开始转录的序列；DNA连接酶；O2；CO2；培养液灭菌、加抗生素抑制细菌生长；抗体
【解答】
【点评】
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发布：2024/4/20 14:35:0组卷：58引用：5难度：0.6
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1．胚胎干细胞（ES细胞）介导法的主要操作过程是：将外源基因导入胚胎干细胞，然后将转基因的胚胎干细胞注射于受体动物胚胎后可参与受体的胚胎构成。如图是利用胚胎干细胞介导法培育出荧光小鼠的过程。回答下列问题：
（1）从水母中获取绿色荧光蛋白基因有多种方法。将水母的全部基因用限制性内切核酸酶切成片段，插入到载体分子中，并将所得的转入大肠杆菌进行克隆保存，这些大肠杆菌的群体称为。
（2）②过程中用到了酶和酶，③过程常用方法，⑥过程通常要对受体母鼠进行处理后才可进行胚胎移植。
（3）关于受体母鼠妊娠产下的子代小鼠的特点，下列叙述正确的是。
A.各细胞都有绿色荧光蛋白基因，所以全身每个细胞都有绿色荧光蛋白产生
B.各细胞都有绿色荧光蛋白基因，但只有部分细胞有绿色荧光蛋白产生
C.不是所有细胞都有绿色荧光蛋白基因，所以只有部分细胞有绿色荧光蛋白产生
D.该小鼠产生的配子中含绿色荧光蛋白基因的概率为12发布：2024/6/27 10:35:59组卷：4引用：1难度：0.7 -
2．自然界中某些细菌可通过代谢将原油转化为稳定无害的终产物，科学家为获得能有效修复原油污染土壤的工程菌展开相关研究。
（1）获得能降解原油的目标菌可从取样，样品经（无菌水/蒸馏水）稀释后涂布于以原油为唯一碳源的固体培养基上培养，分离纯化后获得目标菌A。
（2）目标菌A成膜性差，不能有效控制原油向深层土壤渗透。研究人员将假单胞菌的bdlA基因（约1300bp）导入目标菌A体内，尝试构建成膜性好的工程菌。
①假单胞菌遭受环境压力时，会分泌大量胞外复合物将自身包裹于其中形成细菌聚集膜样物（生物被膜），体现了生物对环境的。
②图1为bdlA基因与pX系列质粒连接构建的重组质粒模式图，为初步检测构建是否成功，可选用限制酶对其切割，并对酶切产物及重组质粒进行凝胶电泳检测，结果如图2。据图2可初步判断重组质粒构建成功，依据是。
（3）上述方法获得的两种工程菌命名为KT2和KT5，在不同时间测定实验组中工程菌及对照组中的生物被膜总量相对值，结果如图3所示。该结果表明。
（4）若要将以上工程菌用于原油污染土壤的修复，举一例说明下一步还应进行哪些方面的研究？发布：2024/4/20 14:35:0组卷：36引用：2难度：0.6
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