幽门螺杆菌（Hp）是慢性胃炎、淋巴增生性胃淋巴瘤的主要致病菌，该菌的Ipp20基因能合成其特有的蛋白质，据此，研究者利用基因工程制备Hp疫苗。已知Ipp20基因表达时，双链DNA的一条链是编码链，另一条链是模板链，如图1；四种限制酶及其识别序列如图2；三种质粒如图3，箭头表示限制酶的切割位点；操作步骤如图4。回答下列问题：
（1）Ipp20基因终止子序列位于图1中的 非编码区2非编码区2区段，该基因转录时，编码起始密码子的序列位于图1中的 编码区编码区区段。
（2）转录产生的mRNA前8个碱基序列为 5′CUCGAGAU5′CUCGAGAU（方向为5′→3′）。若通过PCR技术大量扩增Ipp20基因的编码区段，则需要设计一对引物，其中结合到编码链上的引物序列是 5′TCTAGAGG5′TCTAGAGG（方向为5′→3′，写出5′端8个碱基序列）。
（3）据图1、2、3分析，构建基因表达载体时，应选用的限制酶是 XbaⅠ、XhoⅠXbaⅠ、XhoⅠ，最适合用作载体的质粒是 质粒Z质粒Z。
（4）图4中为筛选出含有目的基因的大肠杆菌，通常采用影印法（使用无菌的线毡布压在培养基A的菌落上，带出少许菌种，平移并压在培养基B上、结果如图所示）。培养基A、B中应分别添加 潮霉素、氯霉素潮霉素、氯霉素，符合实验要求的菌落是 3、53、5（填写数字），判断依据是 菌落3、5在含潮霉素培养基中能生长，但在含氯霉素培养基中不能生长，说明含有因插入目的基因而丢失氯霉素抗性基因的重组质粒菌落3、5在含潮霉素培养基中能生长，但在含氯霉素培养基中不能生长，说明含有因插入目的基因而丢失氯霉素抗性基因的重组质粒。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】非编码区2；编码区；5′CUCGAGAU；5′TCTAGAGG；XbaⅠ、XhoⅠ；质粒Z；潮霉素、氯霉素；3、5；菌落3、5在含潮霉素培养基中能生长，但在含氯霉素培养基中不能生长，说明含有因插入目的基因而丢失氯霉素抗性基因的重组质粒
【解答】
【点评】
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发布：2024/4/20 14:35:0组卷：31引用：3难度：0.6
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发布：2025/1/5 8:0:1组卷：6引用：1难度：0.7 -
2．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
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（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6 -
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