R-7是家蚕体内的一种小分子非编码RNA，可与某些mRNA尾端的一段非编码序列（3′-MTR）结合，进而影响基因的表达。为研究R-7是否影响家蚕基因B（调控家蚕眼睛发育）的表达，科研人员将基因B中对应3′-MTR的DNA片段与荧光素酶基因重组（R-7不影响荧光素酶基因的表达，在适宜条件下，荧光素酶可催化荧光素发生氧化反应并发出荧光），如图1所示。将该重组载体导入家蚕胚胎细胞并检测其表达情况，结果如图2所示。回答下列问题：

（1）基因工程的第一个步骤是

获取目的基因

获取目的基因

。通过3′-MTR获取3′-MTR的DNA片段的可行性方法是

以3'-MTR为模板，逆转录人工合成3'-MTR的DNA片段

以3'-MTR为模板，逆转录人工合成3'-MTR的DNA片段

。要想短时间内获得大量目的基因，需要用到的技术是

PCR扩增技术

PCR扩增技术

。
（2）图1中所示的基因表达载体中含有启动子、终止子和

标记基因（或荧光素酶基因）

标记基因（或荧光素酶基因）

。目的基因（3′-MTR的DNA）片段应插入位点

2

2

。
（3）科研人员从图2所示的实验组和对照组细胞中提取蛋白质，经处理检测后获得相对荧光值。实验组为将重组载体导入含R-7的家蚕胚胎细胞中，对照组1为将重组载体导入不含（或去除）R-7的家蚕胚胎细胞中，则对照组2应为

将不含对应3′-MTR的DNA片段（含有荧光素酶基因）的表达载体导入含R-7的家蚕胚胎细胞中

将不含对应3′-MTR的DNA片段（含有荧光素酶基因）的表达载体导入含R-7的家蚕胚胎细胞中

。由结果推知，R-7通过

与基因B所转录的mRNA尾端的3’-MTR结合

与基因B所转录的mRNA尾端的3’-MTR结合

进而抑制基因B的表达。