CRISPR/Cas9是一种基因编辑技术,科研人员对其进行了一系列改造。

(1)Cas9蛋白能与人工设计的sgRNA形成复合体(如图1)。复合体中的sgRNA与目的基因按照 碱基互补配对碱基互补配对原则特异性结合。复合体在sgRNA引导下结合目的基因,Cas9蛋白切割目的基因造成双链断裂,细胞在修复断裂的DNA时会随机插入、删除或替换部分碱基对,从而引发 基因突变基因突变。
(2)将编码Cas9蛋白的基因改造后形成新基因dCas9,与Cas9蛋白相比,dCas9蛋白失去剪切活性,但与sgRNA结合等功能不变。构建能够表达dCas9的质粒A,设计一系列与红色荧光蛋白基因(RFP基因)上游不同部位结合的sgRNA序列(如图2),并以此为依据构建能表达sgRNA的质粒B,将质粒A、B共同导入含有 RFP基因的大肠杆菌,测定大肠杆菌红色荧光强度,实验结果如图3所示。实验结果显示,对照组的红色荧光强度约为sgRNA3组的 100100倍。由实验结果可以得出:dCas9能抑制基因表达,sgRNA的结合位置距RNA聚合酶结合位点越近,对基因表达的抑制作用越强dCas9能抑制基因表达,sgRNA的结合位置距RNA聚合酶结合位点越近,对基因表达的抑制作用越强。
(3)VP64蛋白可结合RNA聚合酶,激活基因的转录,但VP64蛋白无法识别或结合特定的DNA片段。科研人员欲利用上述系统和VP64蛋白促进特定基因表达,请设计促进细胞中已存在的基因X表达的方案。
(4)请写出CRISPR/Cas9及其改造产品的在科学研究中的应用。
【答案】碱基互补配对;基因突变;100;dCas9能抑制基因表达,sgRNA的结合位置距RNA聚合酶结合位点越近,对基因表达的抑制作用越强
【解答】
【点评】
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发布:2024/6/27 10:35:59组卷:38引用:1难度:0.6
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