大肠杆菌zntA基因和zntB基因编码的Zn2+转运蛋白A和B能将Zn2+排出细胞外，维持细胞内Zn2+稳态。科研人员尝试通过同源重组技术获得zntA和zntB基因被敲除的突变株。如图1是敲除zntA基因的主要流程，其中T3-KmR质粒中的P1-KmR-P2是指KmR（卡那霉素抗性基因）两侧带有两个通用引物位点P1和P2，AmPr代表氨苄青霉素抗性基因。zntA基因两侧同源臂H1和H2的序列已标注，请回答
（1）T3-KmR质粒中组成ori（复制原点）的基本单位是 脱氧核苷酸脱氧核苷酸。除引物1和引物2之外PCR反应体系中还需要加入 热稳定的DNA聚合酶、四种脱氧核苷酸、模板链热稳定的DNA聚合酶、四种脱氧核苷酸、模板链等物质。
（2）下列引物中的 aa、bb（填字母）可作为引物1和引物2，其下划线序列设计的依据是 P1和P2P1和P2。
a5’ATGTCGACTCCTGACAATCACGGCAAGAAAGCCCCTTGT3’
b5’TTATCTCCTGCGCAACAATCTTAACGCACTCGCTGTCGTAT3’
c5’TACAGCTGAGGACTGTTAGTGCCGTTCTTTCGCGGGTGTG3’
d5’AATAGAGGACGCGTTGTTAGAATTGCGTAAGCTACTCCAA3’
（3）将同源重组替换片段导入经过 钙离子钙离子处理过的感受态细胞中。然后将转化后的菌涂布在含有 氨苄青霉素氨苄青霉素的培养基上培养，以筛选发生了同源重组的大肠杆菌。
（4）科研人员初步筛选获得zntA基因敲除菌株KZA07、zntA和zntB基因均被敲除菌株KZAB04，并采用梯度稀释平板点样实验比较它们对不同浓度Zn2+的耐受力，其生长的菌落结果如图2；
①对照组应该选择 znt A和znt B基因没有被敲除的znt A和znt B基因没有被敲除的菌株，高浓度Zn2+培养条件下b组和c组菌株长势不同的原因是 b组还有znt B基因编码的Zn2+转运蛋白B能将Zn2+排出细胞外，维持细胞内Zn2+稳态b组还有znt B基因编码的Zn2+转运蛋白B能将Zn2+排出细胞外，维持细胞内Zn2+稳态（2分）。
②在此基础上，科学家进行了Zn2+功能互补实验：将CzcD（已经被鉴定的具有Zn2+外排功能的蛋白质）基因分别导入a、b、c三组菌株中，得到a1、b1、c1三组菌株，请预期在高浓度Zn2+培养条件下的实验结果：a1组与a组菌株长势无明显差异，b1组长势比b组好，c1组长势显著比c组好b1组长势比b组好，c1组长势显著比c组好。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】脱氧核苷酸；热稳定的DNA聚合酶、四种脱氧核苷酸、模板链；a；b；P1和P2；钙离子；氨苄青霉素；znt A和znt B基因没有被敲除的；b组还有znt B基因编码的Zn2+转运蛋白B能将Zn2+排出细胞外，维持细胞内Zn2+稳态；b1组长势比b组好，c1组长势显著比c组好
【解答】
【点评】
声明：本试题解析著作权属菁优网所有，未经书面同意，不得复制发布。
发布：2024/6/27 10:35:59组卷：10引用：2难度：0.5
相似题
-
1．下列有关基因工程技术和蛋白质工程技术叙述正确的是（ ）
发布：2025/1/5 8:0:1组卷：6引用：1难度：0.7 -
2．下列有关基因工程的叙述，正确的是（ ）
发布：2024/12/31 5:0:5组卷：3引用：2难度：0.7 -
3．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6
