角蛋白酶（KerA）能降解角蛋白，在饲料工业中具有广阔的应用前景。实验小组将KerA基因导入大肠杆菌中，获得了能高效表达KerA的工程菌，下图1为含KerA基因的外源DNA、质粒的有关信息，EcoRⅠ、BamHⅠ、SalⅠ、XhoⅠ均为限制酶，Kanr、Tcr分别为卡那霉素抗性基因、四环素抗性基因。请回答下列问题：
（1）为了获取KerA基因，从天然菌株中提取相应的DNA片段，再通过PCR技术大量扩增，PCR是 聚合酶链式反应聚合酶链式反应的缩写，若一个KerA基因在PCR仪中经过4次循环，需要消耗 3030个引物。
（2）为了形成合适的重组质粒，应该选用XhoⅠ和BamHⅠBamHⅠ限制酶切割外源DNA和质粒DNA，其中不选用SalⅠ限制酶的原因是 SalⅠ会破坏目的基因SalⅠ会破坏目的基因。
（3）重组质粒导入受体细胞的成功率很低，需经筛选才能获得导入成功的受体细胞。结合图1获得的重组质粒，从对抗生素的敏感性角度分析，应选择 对四环素和卡那霉素都敏感对四环素和卡那霉素都敏感的细胞作为受体细胞，才有利于后续的筛选。
（4）将目的基因导入大肠杆菌时，常出现三种情况：未转化的细菌、含空载体（普通质粒）的细菌、含重组质粒的细菌。下图2是KerA基因重组质粒的“工程菌”的筛选示意图，已知培养基中的营养成分能满足大肠杆菌的生存，且1号培养基中不含抗生素，那么在筛选重组质粒时，2号培养基应添加的抗生素是 四环素四环素，3号培养基添加的抗生素是 卡那霉素卡那霉素，2中的 B、DB、D（选用图2中字母作答）菌落为含有目的基因的“工程菌”。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】聚合酶链式反应；30；BamHⅠ；SalⅠ会破坏目的基因；对四环素和卡那霉素都敏感；四环素；卡那霉素；B、D
【解答】
【点评】
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发布：2024/7/31 8:0:9组卷：26引用：3难度：0.6
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1．下列有关基因工程技术和蛋白质工程技术叙述正确的是（ ）
发布：2025/1/5 8:0:1组卷：6引用：1难度：0.7 -
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发布：2024/12/31 5:0:5组卷：3引用：2难度：0.7 -
3．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6
