新冠病毒S蛋白与其侵染宿主细胞密切相关，疫苗的研究与生产有多种途径，回答以下问题。
（1）我国目前已上市的灭活新冠疫苗，是利用Vero细胞（非洲绿猴的肾脏上皮细胞）对病毒进行增殖后灭活，因此需对Vero细胞进行大量培养。传代培养时需利用胰蛋白酶使细胞分散开并制成

细胞悬浮液

细胞悬浮液

。对病毒非灭活是指利用物理或化学手段使病原体失去感染能力，但保留原来的

抗原

抗原

结构。
（2）S蛋白的RBD多肽区域是新冠病毒感染宿主细胞的关键。研究人员现利用基因工程技术生产S蛋白的RBD多肽片段制作重组蛋白疫苗。基本过程如图所示：

（注：LacZ基因可使细菌利用加入培养基的物质X-gal,从而使菌落显现出蓝色。若无该基因或该基因被破坏，则菌落成白色。）
①提取新冠病毒RNA经过

逆转录

逆转录

得到的cDNA，经

PCR

PCR

技术扩增得到RBD基因，与克隆质粒pUC质粒连接，并接种到添加

氨苄青霉素和X-gal

氨苄青霉素和X-gal

的培养基上培养，一段时间后，挑选颜色为

白色

白色

的菌落用液体培养基扩大培养，提取重组质粒pUC-RBD。
②接下来应用限制酶对pUC-RBD进行酶切获得RBD基因，并与BamHI酶和XhoI酶切后的载体pET质粒连接。但RBD基因序列两端无相应限制酶酶切位点，现欲利用RCR技术对RBD基因进行扩增同时在其上下游区域增补上相应限制酶的识别序列，则根据如表，PCR时所用的上下游引物应分别添加的序列是

5’-GGATCC-3’和5’CTCGAG-3’

5’-GGATCC-3’和5’CTCGAG-3’

。

限制酶	BamHⅠ	HindⅢ	XhoⅠ	XbaⅠ
识别序列	5′-GGATCC-3′	5′-AAGCTT-3′	5′-CTCGAG-3′	5′-TCTAGA-3′

③构建好的基因表达载体再次导入大肠杆菌培养，要检测最终是否表达了S蛋白的RBD区域，可以加入

RBD抗体

RBD抗体

进行检测。
（3）有研究表明，现有的疫苗对新出现的变异类型病毒仍具有预防效果，原因是

与原有新冠病毒的抗原结构相似

与原有新冠病毒的抗原结构相似

。