淀粉是食物的重要成分，也是一种重要的工业原料，其水解产物广泛用于糖类及酒精发酵等行业。目前，工厂化水解淀粉需在高温条件下进行，因此开发具有自主产权的耐热性α-淀粉酶并实现大规模生产，对我国淀粉深加工产业的发展具有重要意义。为了实现α-淀粉酶的高效表达和分泌，我国科研人员以芽孢杆菌构建工程菌开展研究。
回答下列问题：
（1）科研人员从某热泉的细菌中发现一种α-淀粉酶（AmyS1），利用蛋白质工程对其进行改造，获得了具有更高热稳定性和催化效率的重组耐高温α-淀粉酶（AmyS2）。其基本操作流程是 ⑤⑥③②⑧⑤⑥③②⑧（从下列操作或思路中，选择正确的序号并排序）
①人工合成AmyS1基因
②人工合成AmyS2基因
③分子设计目标蛋白的氨基酸序列
④预期AmyS1功能
⑤预期AmyS2功能
⑥设计目标蛋白的三维结构
⑦将获得的基因导入受体细胞生产AmyS1
⑧将获得的基因导入受体细胞生产AmyS2
（2）获取AmyS2基因后，构建基因表达载体的过程如图1所示。该过程中，将目的基因与原始质粒A构建成质粒B，应选择的限制酶是 NdeⅠ和EcoRⅠNdeⅠ和EcoRⅠ；将质粒B与信号肽基因构建成质粒C，应选择的限制酶是 MluⅠ和Eco52ⅠMluⅠ和Eco52Ⅰ。
（3）信号肽是一段能够引导目标蛋白质分泌到细胞外的肽链。据此推测，与质粒B相比，在工业生产中使用导入质粒C的工程菌生产α-淀粉酶的优势是 芽孢杆菌可以将α-淀粉酶分泌到细胞外，便于从培养液中提取产物芽孢杆菌可以将α-淀粉酶分泌到细胞外，便于从培养液中提取产物。
（4）研究发现，芽孢杆菌会分泌一种胞外蛋白酶（控制其合成的基因是bcp），导致胞外α-淀粉酶被降解。请从改造工程菌的角度提出一条解决该问题的思路 用敲除了bcp基因（或抑制bcp基因的表达）的芽孢杆菌作为工程菌生产AmyS2用敲除了bcp基因（或抑制bcp基因的表达）的芽孢杆菌作为工程菌生产AmyS2。
（5）检测获得的α-淀粉酶的特性，结果如图所示。在工厂化生产中，利用该酶水解淀粉时，应设置的温度是 90（或“90～100”）90（或“90～100”）℃，理由是 α-淀粉酶在90℃（或“90～100℃”）时相对酶活性和热稳定性均较高α-淀粉酶在90℃（或“90～100℃”）时相对酶活性和热稳定性均较高。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】⑤⑥③②⑧；NdeⅠ和EcoRⅠ；MluⅠ和Eco52Ⅰ；芽孢杆菌可以将α-淀粉酶分泌到细胞外，便于从培养液中提取产物；用敲除了bcp基因（或抑制bcp基因的表达）的芽孢杆菌作为工程菌生产AmyS2；90（或“90～100”）；α-淀粉酶在90℃（或“90～100℃”）时相对酶活性和热稳定性均较高
【解答】
【点评】
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发布：2024/4/20 14:35:0组卷：21引用：2难度：0.7
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1．下列有关基因工程技术和蛋白质工程技术叙述正确的是（ ）
发布：2025/1/5 8:0:1组卷：6引用：1难度：0.7 -
2．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6 -
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