RBD是新型冠状病毒表面囊膜S蛋白的受体结合域肽段。Fc为人源抗体IgGⅠ的部分重链，能通过二硫键相结合形成Fc二聚体。科研人员为研制重组蛋白疫苗，构建了融合表达RBD和Fc的重组质粒。实验流程图如图，请回答下列问题。
（1）通过重叠延伸PCR（重叠链相互搭桥、互为模板而延伸，最终将不同来源的DNA片段拼接起来）获取融合基因。
①第一次PCR中，至少经 22次扩增，可得到末端平齐且含引物2的产物；扩增n次后，末端平齐且含引物2的DNA分子数量为 2n-n-12n-n-1个；
②第二次PCR扩增表达Fc的DNA片段；
③经第三次PCR获取融合基因，第三次PCR比第一次PCR延伸所需时间 长长（选填“长”或“短”），原因是 第三次PCR中待扩增的片段长第三次PCR中待扩增的片段长。
（2）构建基因表达载体
| 分步实验目的 | 简易操作 |
| 酶切融合基因和质粒pCDNA3.1 | 37℃条件下，酶切8小时，电泳鉴定、回收；酶切位点应添加在引物① 1和4 1和4 的末端。（填引物种类） |
| 获取重组质粒 | 将上述融合基因、质粒和② DNA连接 DNA连接 酶一起加入反应体系，16℃反应过夜。 |
| 利用大肠杆菌③ 扩增重组质粒 扩增重组质粒 |
将产物加入感受态大肠杆菌培养液，培养过夜，提取更多重组质粒。 |
使重组DNA进入受体细胞
使重组DNA进入受体细胞
。（4）已知RBD二聚体疫苗比RBD单体疫苗效果更优，推断重组蛋白中Fc的作用是
有效介导RBD二聚体的形成
有效介导RBD二聚体的形成
。【考点】基因工程的操作过程综合；DNA片段的扩增与电泳鉴定．
【答案】2；2n-n-1；长；第三次PCR中待扩增的片段长；1和4；DNA连接；扩增重组质粒；使重组DNA进入受体细胞；有效介导RBD二聚体的形成
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：34引用：1难度：0.6
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（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6
