蜘蛛丝是自然界中机械性能最好的天然蛋白纤维，其强度高于制作防弹衣的凯夫拉纤维，有广泛的应用前景。但如何大量获取蜘蛛丝纤维的问题一直难以解决。2018年8月，中科院分子植物科学卓越创新中心利用基因工程技术成功的在家蚕丝腺和蚕茧中大量表达蜘蛛丝蛋白。回答下列问题：
（1）构建基因表达载体时，需要在目的基因前后两端分别引入

XbaⅠ和SacⅠ

XbaⅠ和SacⅠ

的酶切位点，该方法比用同一种酶进行酶切的优势是

防止目的基因自身环化，防止目的基因反向连接等

防止目的基因自身环化，防止目的基因反向连接等

（答出两点）。
（2）为能从蚕丝中提取蛛丝蛋白，基因表达载体中目的基因的首段必须含有使其仅能在蚕的丝腺细胞中特异性表达的

启动子

启动子

。当其与

RNA聚合酶

RNA聚合酶

识别和结合后才能驱动基因成功表达。
（3）研究人员发现若将蛛丝蛋白31号位的色氨酸替换为酪氨酸，蛛丝韧性可提高50%，此成果所用到的工程技术为

蛋白质工程

蛋白质工程

。
（4）在研究过程中，发现目的基因已经插入到蚕丝腺细胞染色体的DNA上，蚕丝中却未能提取到蜘蛛丝，请分析可能出现的原因并说出其相应的检测方法：

目的基因没有进行正确的转录，可用DNA探针进行分子杂交的方法进行检测；目的基因转录出的RNA没有进行翻译，可用抗原—抗体反应进行检测

目的基因没有进行正确的转录，可用DNA探针进行分子杂交的方法进行检测；目的基因转录出的RNA没有进行翻译，可用抗原—抗体反应进行检测

（答两点）。