人乳头瘤病毒HPV是双链DNA病毒，可以引起人皮肤黏膜上皮增生。HPV病毒的DNA分子与健康细胞的细胞核结合，利用细胞产生出两种蛋白E6、E7，它们会附着在抑癌基因p53和pRb上，并关闭它们的功能。默沙东九价HPV疫苗是利用酿酒酵母菌进行生产。
（1）相较于其他模式生物而言，酵母菌具有

繁殖快、遗传物质相对较少

繁殖快、遗传物质相对较少

等特点，能更快获得工程目标。
（2）图1为重组质粒构建的过程，其中AvrⅡ的酶切序列与位点是C↓CTAGG；SnaBⅠ的酶切序列与位点是TAC↓GTA；SacⅠ的酶切序列与位点是GAGCT↓C；BglⅡ的酶切序列与位点是 A↓GATCT。在对HPV的DNA进行PCR扩增时，需要设计两种引物以保证目的基因和质粒有相同的限制酶识别序列，根据选择的质粒及各限制酶识别序列，引物中需要有序列

-CCTAGG-和-TACGTA-

-CCTAGG-和-TACGTA-

。将得到的重组质粒置于含有Ca²⁺的酿酒酵母培养液中，酵母菌吸收后，接种到

含有氨苄青霉素

含有氨苄青霉素

培养基上进行初步筛选，得到含有该质粒的酵母菌，挑取菌落转移到96孔板上培养，利用

抗原-抗体杂交

抗原-抗体杂交

技术鉴定筛选确实表达了HPV的E6、E7蛋白质的酿酒酵母，再进行扩大培养。

（3）在宫颈癌筛查中有HPV检查，取病宫颈组织和局部黏液、分泌物进行HPV-DNA检测。病毒DNA的检测一般采取Real-time PCR技术即实时荧光测序（如图2所示），需要的物质有

耐高温的DNA聚合酶

耐高温的DNA聚合酶

、4种脱氧核苷酸、患者的组织或分泌物、水、缓冲液、两种引物。探针序列含有HPV的特定序列，随着PCR循环次数的增加，很快就检测到了荧光，说明该患者

有

有

（有\没有）HPV病毒。