重组工程是一项新型的基因操作技术，其基本原理是通过重组酶将特定的单链DNA片段与双链DNA分子在同源序列处重组，从而实现基因的敲除、替换和突变等修饰。图1表示DNA单链重组过程示意图，请回答问题：

（1）基因工程的核心是在体外构建

基因表达载体

基因表达载体

，该过程中使用的酶是

限制酶和DNA连接

限制酶和DNA连接

。
（2）图2是大肠杆菌pBR322-Red质粒的示意图。科研人员欲利用重组工程技术敲除该质粒上从kil基因至N基因之间的DNA序列，设计的单链多核苷酸引物应为

①、④

①、④

的连接序列（在①、②、③、④中选填）。

（3）将单链多核苷酸与含有pBR322-Red质粒的大肠杆菌感受态细胞混合、电击转化，在重组酶的作用下，理论上1%～6%的大肠杆菌会发生体内同源重组。已知线性化质粒无法转化大肠杆菌。为了从大肠杆菌混合物中筛选出发生重组的克隆，科研人员进行了下列操作。请完成表格相关内容。

目的	简要操作
扩大培养	①将大肠杆菌混合物全部转入含 氨苄青霉素 氨苄青霉素 的液体培养基中
质粒提取、酶切	②提取质粒，选择限制酶 XhoXhoⅠ XhoXhoⅠ 进行处理
转化	③用酶切产物转化 不含 不含 （“含有”或“不含有”）pBR322-Red质粒大肠杆菌的感受态细胞
鉴定、筛选	④菌落PCR技术、琼脂糖凝胶电泳

（4）图3为用琼脂糖凝胶电泳鉴定的结果，其中泳道

1

1

（填“1”或“2”）对应的是kil-N基因缺失的质粒。

（5）常规的基因工程和重组工程都能将外源基因插入质粒。一般情况下，限制酶在质粒上存在多个作用位点，因此常规的基因工程技术构建重组质粒时会出现

目的基因插入位置不准确

目的基因插入位置不准确

现象，而重组工程技术可以提高精准度。