转染是指利用一定手段使外源基因进入细胞中并稳定表达的过程。腺病毒载体常用于外源基因的转染,这在基因治疗、疫苗研发和动物细胞培养的可视化监控方面有着广阔的应用前景。回答下列问题。
(1)腺病毒营寄生寄生活,用作转染的腺病毒载体上具有RNA聚合酶RNA聚合酶识别和结合的部位,是外源基因在受体细胞中启动表达的关键。
(2)构建腺病毒载体时,先用同种限制酶对腺病毒DNA和外源基因进行切割,可获得相同的黏性末端或平末端黏性末端或平末端,再用DNA连接酶恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键磷酸二酯键。
(3)通过腺病毒载体将蓝色荧光基因转染山羊耳缘成纤维细胞,利用蓝色荧光直观监控细胞的体外培养过程。首先将山羊耳缘组织块用胰蛋白酶或胶原蛋白酶胶原蛋白酶处理得到单个成纤维细胞,培养至贴满瓶壁时,细胞就会停止分裂增殖,这种现象称为细胞的接触抑制细胞的接触抑制。这时,重新用胰蛋白酶等处理,然后分瓶继续进行传代传代培养。培养时使用的合成培养基,通常需加入血清、血浆血清、血浆等一些天然成分,以满足细胞对营养物质的全面需求。
【考点】动物细胞培养的条件与过程.
【答案】寄生;RNA聚合酶;黏性末端或平末端;磷酸二酯键;胶原蛋白酶;细胞的接触抑制;传代;血清、血浆
【解答】
【点评】
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