乙型肝炎病毒（HBV）感染引起的急慢性乙型肝炎是世界范围的严重传染病，HBV的主要抗原性由乙肝病毒表面抗原（HBsAg）体现。巴斯德毕赤酵母含有乙醇氧化酶（AOX1）的强启动子5'AOX1，利用重组巴斯德毕赤酵母生产高纯度人乙肝疫苗对预防HBV感染具有重大的社会效益。如图为巴斯德毕赤酵母表达乙肝表面抗原的主要流程，请据图回答下列问题：
（1）组成质粒pBSAG151的单体是 脱氧核糖核苷酸脱氧核糖核苷酸，5′AOX1是 RNA聚合RNA聚合酶的识别和结合位点。某兴趣小组为扩增乙肝病毒表面抗原编码基因设计一对引物，引物分别为5′-ATGGAGA-3'、5′-ATGTAAA-3′，结果无法正确达成目的，请分析这对引物不合理的原因可能是 引物序列太短，特异性不强；引物方向错误引物序列太短，特异性不强；引物方向错误。
（2）将组氨醇脱氢酶基因（HIS4）和利用两种限制酶 EcoRI和StuIEcoRI和StuI切割所得的HBSAg编码序列插入到启动子5′AOX1和终止子3'AOX1之间构成环状重组质粒pBSAG151。
（3）在回收大片段之前，可将pBSAG151导入处于感受态的大肠杆菌中，其主要目的是 扩增并获得大量重组质粒（目的基因）扩增并获得大量重组质粒（目的基因）。在借助 电泳电泳等技术回收大片段之前，选用限制酶BglII切割有利于降低DNA分子大小，有助于转化受体细胞。
（4）为了检测是否表达出HBsAg,应从成功导入HBsAg基因的菌株中提取蛋白质，用 抗原一抗体杂交抗原一抗体杂交方法检测。检测发现通过巴斯德毕赤酵母表达产生的HBsAg空间结构与血源的HBsAg无显著差异，远优于重组大肠杆菌表达的HBsAg,从细胞结构上分析，其主要原因是 含有内质网和高尔基体，可对HIBsAg的表达产物进行准确的加工含有内质网和高尔基体，可对HIBsAg的表达产物进行准确的加工。
（5）如图为HBsAg基因片段一条链的部分碱基排列顺序，其中图1的碱基排列顺序已经解读，其顺序是：5′-GGTTATGCGT-3'，请解读图2显示的碱基排列顺序：5’-GATGCGTTCG-3'5’-GATGCGTTCG-3'。
（6）重组HBV疫苗产业化生产过程中，将重组酵母经过单细胞克隆化培养后挑选HBsAg表达水平高且稳定的菌种继续 扩大培养扩大培养，后分装到50～100个小瓶中在-70℃以下储存，这些小瓶称为“母种库”。从“母种库”取1瓶或数瓶母种进行再扩增，分装到100～500个小瓶中，同样在-70℃以下储存，这些小瓶称为“生产菌种库”，这种菌种系统制备方法的主要优势是 保证每个批次的生产菌株都起源于同一重组菌株，确保疫苗品质的稳定保证每个批次的生产菌株都起源于同一重组菌株，确保疫苗品质的稳定。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】脱氧核糖核苷酸；RNA聚合；引物序列太短，特异性不强；引物方向错误；EcoRI和StuI；扩增并获得大量重组质粒（目的基因）；电泳；抗原一抗体杂交；含有内质网和高尔基体，可对HIBsAg的表达产物进行准确的加工；5’-GATGCGTTCG-3'；扩大培养；保证每个批次的生产菌株都起源于同一重组菌株，确保疫苗品质的稳定
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：29引用：2难度：0.5
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（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6
