某科研团队利用小鼠筛选获得一种针对禽流感病毒的鼠源单克隆抗体13D4。为了降低其应用于人体治疗时可能产生的免疫排斥反应，将其改造为人-鼠嵌合抗体13D4-cAb,之后将构建好的真核表达载体导入中国仓鼠卵巢细胞（CHO 细胞）后，筛选能够稳定表达的细胞株，通过转瓶培养、表达，纯化后获得大量嵌合抗体用于研究。请根据资料回答下列问题：
（1）研究人员从分泌13D4单克隆抗体的 杂交瘤杂交瘤细胞中提取总RNA或mRNA，经处理得到轻、重链抗原结合区的cDNA用于 PCR扩增，并分别与人抗体轻、重链生物反应区DNA序列拼接，构建人-鼠嵌合抗体13D4-cAb的真核表达载体用于表达。
（2）将重组质粒导入CHO细胞后，可采用 分子杂交分子杂交技术检验轻、重链基因是否成功转录，最后还需要通过 抗原--抗体杂交抗原--抗体杂交技术检验目的基因是否成功表达并组装出有生物学活性的嵌合抗体。
（3）应用转瓶培养筛选获得的细胞，需将转瓶放入CO2培养箱，以维持37℃和5% CO2等培养条件，合成培养基中通常还需加入 血清血清或血浆等一些天然成分。为避免出现细胞的 接触抑制接触抑制现象，当细胞铺满转瓶内壁约80%左右时，应当使用 胰蛋白酶胰蛋白酶等处理，然后分瓶继续培养。
（4）PCR反应体系中，若一个模板DNA消耗引物分子14个，则该DNA扩增了 33轮。
（5）上述嵌合抗体的生产体现了 蛋白质蛋白质工程技术的应用。
【考点】动物细胞培养的条件与过程；单克隆抗体及其应用．
【答案】杂交瘤；分子杂交；抗原--抗体杂交；血清；接触抑制；胰蛋白酶；3；蛋白质
【解答】
【点评】
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发布：2024/4/20 14:35:0组卷：56引用：2难度：0.7
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1．动物细胞培养和植物组织培养是细胞工程的基本技术，下列关于这两项技术的叙述，正确的是（ ）
发布：2024/12/31 1:30:1组卷：29引用：2难度：0.7 -
2．回答与基因工程、动物克隆和胚胎工程有关的问题：
（1）几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。在进行基因工程操作时，可以从植物体中提取几丁质酶的mRNA，以mRNA为材料可以获得cDNA，其原理是。若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。
（2）为了提高动物成纤维细胞克隆形成率，可以选择适宜的培养基、添加牛血清、以支持生长等措施。当第一个卡氏瓶中的细胞浓度不再增加时，若要细胞继续增殖，可采用的方法是。细胞培养过程中，培养箱中通常要维持一定的CO2浓度，CO2的作用是。
（3）下列关于胚胎工程的叙述，错误的是
A．在动物的饲料中添加一定量的促性腺激素促使超数排卵
B．若在囊胚期进行胚胎分割，内细胞团均等分割，滋养成则不必
C．可以从雌性动物体内卵泡处吸取卵泡液，取出卵母细胞进一步培养成熟
D．胚胎成纤维细胞可以用于胚胎干细胞的培养，因为其能分泌抑制细胞分化的物质。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：4引用：1难度：0.7 -
3．据国际糖尿病联盟最新数据，2021年全球约5.37亿成人患有糖尿病，670万成人因糖尿病或其并发症死亡。如图是研究人员提出的治疗方案，请回答下列问题：
（1）从患者体内获得体细胞后，对其进行的初次培养称为，培养的细胞在贴壁生长至铺满培养皿底时停止分裂，这种现象称为。一般来说，动物细胞培养需要的条件有（少答出两点）。
（2）利用PCR技术扩增正常胰岛素基因的前提条件是。目前临床用的胰岛素生效较慢，科学家将胰岛素β链的第28和29个氨基酸调换顺序，成功获得了速效胰岛素。生产速效胰岛素，需要对进行定向改造。
A.胰岛素
B.胰岛素mRNA
C.胰岛素基因
D.胰岛
（3）欲检测胰岛类似细胞是否具有胰岛B细胞的正常生理功能，可设计如下实验：将等量的胰岛类似细胞与正常胰岛B细胞分别加入两组相等浓度的培养液中，适宜且相同条件下进行培养，一段时间后分别检测两组培养液中。
（4）该治疗糖尿病的方法与异体移植相比，突出的优点是。发布：2024/12/31 2:30:2组卷：35引用：2难度：0.6
