基因编辑是一种新兴的比较精确的能对生物体基因组特定目标基因进行修饰的一种基因工程技术或过程。两位女科学家因发现“CRISPR/Cas9基因剪刀”而获得2020年诺贝尔化学奖。CRISPR/Cas9系统可对基因组进行定点编辑，其工作原理如图1所示。人血清白蛋白（HSA）具有重要的医用价值，只能从血浆中制备，以基因工程技术获取重组HSA（rHSA）的两条途径如图2所示。请回答下列问题：

（1）据图1可知，在sgRNA1和sgRNA2的引导下，Cas9使基因中的

磷酸二酯

磷酸二酯

键断裂，最终实现对靶基因序列的编辑。但该技术有时存在编辑对象出错而造成“脱靶”，实验发现sgRNA的序列长短影响成功率，越短脱靶率越

高

高

（填“高”或“低”）。
（2）获取HSA基因，首先需采集人的血液，提取总RNA合成总cDNA，然后以cDNA为模板，采用PCR技术扩增HSA基因（5′CTTCGAAATTC-HSA基因-TCTCCCGATCGG3′），根据其两端序列，则需要选择的一对引物序列是

A

A

（填字母）。若一条单链cDNA在PCR仪中进行4次循环，则需要消耗

15

15

个引物。
A．引物Ⅰ是5′-CTTCGAAATTC-3′，引物Ⅱ是5′-CCGATCGGGAGA-3′
B．引物Ⅰ是5′-CTTCGAAATTC-3′，引物Ⅱ是5′-TCTCCCGATCGG-3′
C．引物Ⅰ是5′-GAAGCTTTAAG-3′，引物Ⅱ是5′-AGAGGGCTAGCC-3′
D．引物Ⅰ是5′-GAAGCTTTAAG-3′，引物Ⅱ是5′-CCGATCGGGAGA-3′
（3）图甲为获取的含有目的基因（HAS基因）的DNA片段，Sau3AⅠ、EcoRⅠ、BamHⅠ为三种限制酶，图中箭头所指为三种限制酶的切点；图乙是三种限制酶的识别序列与酶切位点示意图；图丙是土壤农杆菌中用于携带目的基因的Ti质粒结构示意图。
若用BamHⅠ切割图甲所示的DNA片段，获得目的基因，则需选用

Sau3AⅠ

Sau3AⅠ

切割图丙所示质粒，以便构建基因表达载体，上述方案存在一定缺陷，故切割图甲所示DNA片段的最佳方案是选用

EcoRⅠ、BamHⅠ

EcoRⅠ、BamHⅠ

酶。用上述最佳方案构建基因表达载体，所得重组质粒

不一定能

不一定能

（选填“能”、“不能”或“不一定能”）被BamHⅠ切割。
（4）启动子通常具有物种及组织特异性，构建在水稻胚乳细胞内特异表达rHSA的载体，需要选择的启动子是

B

B

（填字母）。
A．人血细胞启动子
B．水稻胚乳细胞启动子
C．大肠杆菌启动子
D．农杆菌启动子
（5）若利用乳腺生物反应器来生产rHSA，则应将重组HSA导入

受精卵

受精卵

。为证明rHSA具有医用价值，须确认rHSA与

HSA

HSA

的生物学功能一致。