如果已知一小段DNA的序列，可采用PCR的方法，简捷地分析出已知序列两侧的序列，具体流程如图（以EcoRⅠ酶切为例）：

请据图回答问题：
（1）步骤Ⅰ用的EcoRⅠ主要存在于

原核

原核

生物中，限制酶存在于该类生物中的主要作用是

切割外源DNA，保证自身安全

切割外源DNA，保证自身安全

。
（2）步骤Ⅱ用的DNA连接酶催化相邻核苷酸之间的3′-羟基与5′-磷酸间形成

磷酸二酯键

磷酸二酯键

；PCR每次循环一般可分为

变性、复性、延伸

变性、复性、延伸

（按顺序书写）三步，其中第二步的目的是

引物与两条模板DNA单链结合

引物与两条模板DNA单链结合

。
（3）若如表所列为已知的DNA序列和设计的一些PCR引物，步骤Ⅲ选用的PCR引物必须是

③④

③④

（从引物①②③④中选择，填编号）。

	DNA 序列（虚线处省略了部分核苷酸序列）
已知序列
PCR 引物	①5′-AACTATGCGCTCATGA-3′ ②5′-AGAGGCTACGCATTGC-3′ ③5′-GCAATGCGTAGCCTCT-3′ ④5′-TCATGAGCGCATAGTT-3′

（4）对PCR产物测序，经分析得到了片段F的完整序列。下列DNA单链序列中（虚线处省略了部分核苷酸序列），结果正确的是

D

D

。
A．5′-AACTATGCG----------AGCCCTT-3′
B．5′-TTGATACGC----------CGAGTAC-3′
C．5′-GCAATGCGT----------TCGGGAA-3′
D．5′-AATTCCATG----------CTGAATT-3′