铝在土壤中常以铝酸盐的形式存在，可造成土壤酸化而影响植物生长。铝能抑制植物根尖细胞的分裂，破坏根组织。某植物甲的根毛细胞的细胞膜上存在苹果酸通道蛋白（ALMT），该通道蛋白能将苹果酸转运到细胞外来缓解铝毒。可将控制ALMT的基因导入不耐铝的植物中，最终获得耐铝植物。请回答下列问题：
（1）如表是运载体上出现的几种限制酶的识别序列及切割位点。用表中的限制酶切割 DNA后能形成相同黏性末端的是 XhoI与SalIXhoI与SalI。（识别序列中的1表示酶切位点）
| 限制酶 | 识别序列和切割位点 |
| EcoRⅠ | G↓AATTC |
| BamHⅠ | G↓GATCC |
| HindⅢ | A↓AGCTT |
| XhoⅠ | C↓TCGAG |
| NdeⅠ | CA↓TATG |
| SalⅠ | G↓TCGAC |
植物甲的根（根毛）细胞
植物甲的根（根毛）细胞
细胞中获取总mRNA，在相应酶作用下获得多种cDNA，再利用ALMT基因制作出特异性 引物
引物
，通过PCR方法得到ALMT基因的cDNA。（3）启动子是
RNA聚合酶
RNA聚合酶
识别并结合的位点，能调控目的基因的表达。ALMT基因的启动子有两种类型，其中α启动子能使ALMT基因在酸性土壤的诱导下表达，β启动子能使ALMT基因高效表达而无需酸性诱导。在获得转ALMT基因耐铝植物时应使用 α
α
启动子，不使用另外一种启动子的原因是 β启动子可使植物根细胞持续转运有机酸
β启动子可使植物根细胞持续转运有机酸
，导致正常土壤酸化，并影响植物生长。（4）科研人员采用农杆菌转化法，首先将ALM基因导入植物细胞并整合到受体细胞染色体的DNA上，再通过
植物组织培养
植物组织培养
技术成功获得了耐铝植株。（5）若将一株耐铝植株与普通植株杂交，得到的后代中耐铝植株：普通植株约为3：1，则可判断这株耐铝植株细胞至少转入了
2
2
个ALMT基因，转入的基因在染色体上的位置关系是：分别位于两条非同源染色体上
分别位于两条非同源染色体上
；若使这株耐铝植株自交，后代中耐铝植株：普通植株约为 15：1
15：1
。【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】XhoI与SalI；植物甲的根（根毛）细胞；引物；RNA聚合酶；α；β启动子可使植物根细胞持续转运有机酸；植物组织培养；2；分别位于两条非同源染色体上；15：1
【解答】
【点评】
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发布：2024/4/20 14:35:0组卷：10引用：1难度：0.6
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（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
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