CAV-2（犬2型腺病毒）弱毒株广泛应用于基因治疗载体和病毒活疫苗载体研究。该病毒的E3区为病毒复制的非必需区，构建缺失E3区的CAV-2载体，可以提高CAV-2外源基因容量。过程如图。
（1）过程①中扩增E3区上/下游同源重组臂的技术为PCRPCR技术，该技术中用到的关键酶是taqDNA聚合（taq）taqDNA聚合（taq）酶。设计扩增上游同源重组臂的1对引物时，分别引入EcoRⅠ位点和KpnⅠ、SpeⅠ位点。设计下游同源重组臂的1对引物时，分别引入KpnⅠ位点和HindⅢ位点。在反应体系中加入CAV-2基因组DNA的作用 作为模板作为模板。
（2）过程②中，上游同源重组臂经EcoRⅠ/KpnⅠEcoRⅠ/KpnⅠ酶切，下游同源重组臂经KpnⅠ/HindⅢKpnⅠ/HindⅢ酶切，再将他们与经EcoRⅠ/HindⅢ酶切的Puc18质粒连接在一起，形成pUC-△E3质粒。
（3）过程③中，设计两端引物时，都引入SpeⅠSpeⅠ位点，经酶切得到的含EGFP（增强绿色荧光蛋白）等序列的DNA片段A。DNA片段A和pUC-△E3质粒经SpeⅠ酶切后，连接在一起。因为 连接方向可能错误（自身环化）连接方向可能错误（自身环化），所以还需经过鉴定和筛选才能得到pUC-△E3-EGFP质粒。
（4）CAV-2感染犬肾上皮细胞后，导入pUC-△E3-EGFP质粒，经多次纯化后，得到重组的CAV-2病毒，这种病毒的变异类型属于 基因重组基因重组。
（5）基因工程应用过程中，外源基因可能会与感染转基因生物的某些病毒杂交，从而重组出对人类或其他生物有害的病原体，这是引发了人们在 生物生物安全方面发生了激烈的争论的原因之一。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】PCR；taqDNA聚合（taq）；作为模板；EcoRⅠ/KpnⅠ；KpnⅠ/HindⅢ；SpeⅠ；连接方向可能错误（自身环化）；基因重组；生物
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：7引用：1难度：0.7
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