环介导恒温扩增技术（LAMP），因操作简便，能快速、精确地进行基因扩增而得到广泛的应用。LAMP使用的酶是有链置换效应的Bst DNA聚合酶，其原理如图1所示，请回答下列问题：
（1）LAMP技术温度控制在63℃左右，与常规PCR相比，其简化之处是不需要 变性、复性、延伸过程的循环（或温度循环）变性、复性、延伸过程的循环（或温度循环）；另一个简化之处是通过肉眼观察有无白色沉淀焦磷酸镁即可判断靶基因是否复制，推测其中的焦磷酸来自 dNTPdNTP水解。
（2）如图1，针对靶基因上的6个区域设计了4条引物，其中决定主要产物长度的是 2条内部引物（或FIP、BIP）2条内部引物（或FIP、BIP），由引物F3延伸出子链的作用是 促进链置换，增加模板数量促进链置换，增加模板数量。部分单链DNA两端成环状，环状结构中局部双链的形成依赖 碱基互补配对碱基互补配对原则。
（3）将LAMP技术用于猕猴桃褪绿环斑相关病毒（AcCRaV）的核酸检测，为找到最适宜的靶序列扩增温度，研究者设定56-63℃温度梯度，并进行染色、电泳等操作后，得到如图2实验结果。据图可知，此靶序列最佳扩增的温度为 6262℃，电泳后出现梯形条带，该结果说明 LAMP技术扩增得到的DNA不等长LAMP技术扩增得到的DNA不等长。
（4）将LAMP技术用于新冠病毒（SARS-CoV-2）的核酸检测，先要进行如下操作：
| 实验步骤 | 简要操作过程 |
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采集样本 采集样本
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用医用棉签从上呼吸道采集咽拭子或鼻拭子，然后低温封存并送检测机构进行检测 |
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提取RNA 提取RNA
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向样本中加入Trizol裂解蛋白质成分，再加入氯仿并离心，吸取上层水相置于新的EP离心管中，加入等体积的异丙醇，离心弃上清液，加入乙醇洗涤，离心弃上清液，晾干后加入DEPC水解液破坏RNA水解酶。 |
| 合成cDNA | 向样本中加入缓冲液、 逆转录酶、引物 逆转录酶、引物 和dNTP，在PCR仪中获得cDNA产物。 |
【考点】DNA片段的扩增与电泳鉴定；目的基因的筛选与获取．
【答案】变性、复性、延伸过程的循环（或温度循环）；dNTP；2条内部引物（或FIP、BIP）；促进链置换，增加模板数量；碱基互补配对；62；LAMP技术扩增得到的DNA不等长；采集样本；提取RNA；逆转录酶、引物
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：27引用：2难度：0.5
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1．科学家为了提高光合作用过程中Rubiaco酶对CO2的亲和力，利用PCR定点突变技术改造Rubisco酶基因，从而显著提高了植物的光合作用速率。请回答下列问题：
（1）PCR定点突变技术属于（填“基因工程”或“蛋白质工程”）。可利用定点突变的DNA构建基因表达载体，常用将基因表达载体导入植物细胞，还需用到植物细胞工程中的技术，才能最终获得转基因植物。
（2）PCR过程所依据的原理是。利用PCR技术扩增，若将一个目的基因复制10次，则需要在缓冲液中至少加入个引物。
（3）目的基因进入受体细胞内，并在受体细胞内维持稳定和表达的过程称为。科研人员通过实验研究发现培育的该转基因植株的光合作用速率并未明显增大，可能的原因是。
（4）另有一些科学家利用生物技术将人的生长激素基因导入小鼠受精卵的细胞核中，经培育获得一种转基因小鼠，其膀胱上皮细胞可以合成人的生长激素并分泌到尿液中。有关叙述错误的是。
A．选择受精卵作为外源基因的受体细胞是因为这种细胞的全能性最容易表达
B．采用DNA分子杂交技术可检测外源基因在小鼠细胞内是否成功表达
C．人的生长激素基因能在小鼠细胞表达，说明遗传密码在不同种生物中可以通用
D．将转基因小鼠体细胞进行核移植（克隆），可以获得多个具有外源基因的后代发布：2025/1/16 8:0:1组卷：14引用：2难度：0.6 -
2．数字PCR技术是一种核酸分子绝对定量技术，其原理如图所示。下列有关叙述正确的是（ ）
发布：2024/12/30 23:30:2组卷：7引用：2难度：0.6 -
3．下列关于DNA片段扩增及其鉴定的说法错误的是（ ）
发布：2024/12/30 23:30:2组卷：3引用：3难度：0.7
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