IKK激酶由IKKα、IKKβ和IKKγ三种亚基组成，该酶参与动物体内免疫细胞的分化。临床上发现某重症联合免疫缺陷（SCID）患儿IKKB基因编码区第1183位碱基T突变为C，导致ⅡKKβ上第395位酪氨酸被组氨酸代替。为研究该患儿发病机制，研究人员应用大引物PCR定点诱变技术培育出SClD模型小鼠，主要过程如下图1、2。分析回答：
（1）在PCR反应体系中，需要加入引物和IKKB基因外，还需要加入 Taq酶（耐高温DNA聚合酶）、4种脱氧核苷酸Taq酶（耐高温DNA聚合酶）、4种脱氧核苷酸等。在图1获取突变基因过程中，需要以下3种引物：
引物A：5′-CCCCAACCGGAAAGTGTCA-3′（下划线字母为突变碱基）
引物B：5′-TAAGCTTCGAACATCCTA-3′（下划线部分为限制酶HindⅢ识别序列）
引物C：5′-GTGAGCTCGCTGCCCCAA-3′（下划线部分为限制酶SacⅠ识别序列）
则PCR1中使用的引物有 引物A和引物C引物A和引物C，PCR2中使用的引物有 引物B引物B和图中大引物的 ②②（填“①”或“②”）链。
（2）图2模型鼠培育过程中杂合模型鼠（F0）的培育涉及了一系列现代生物技术，如表是其中的一些步骤，请根据题意完成表格内容。
| 过程 | 实验目的 | 步骤要点 |
| 导入 | a.处理突变基因与载体 | ① 利用限制酶（SacⅠ、HindⅢ）分别处理突变基因和载体 利用限制酶（SacⅠ、HindⅢ）分别处理突变基因和载体 |
| b.构建重组载体 | 利用DNA连接酶催化突变基因和载体连接 | |
| C.导入目的基因 | ② 利用显微注射法将重组载体注入小鼠受精卵 利用显微注射法将重组载体注入小鼠受精卵 |
|
| 发育 | d.获取早期胚胎 | 利用专用培养液培养受精卵，并检测其发育状况 |
| e.代孕获得小鼠 | ③ 利用合适的早期胚胎进行胚胎移植 利用合适的早期胚胎进行胚胎移植 |
|
| f.鉴定、筛选F0小鼠 | 利用PCR鉴定基因，筛选出杂合鼠F0 |
基因分离
基因分离
定律。研究人员对三种基因型小鼠胸腺淋巴细胞中组成IKK激酶的三种亚基进行提纯和电泳，结果如图3。请依据此结果提出SClD患者免疫缺陷图3胸腺淋巴细胞中IKK激酶的三种亚基含量 IKKB基因突变导致IKKβ含量减少，IKK激酶活力降低，T细胞减少
IKKB基因突变导致IKKβ含量减少，IKK激酶活力降低，T细胞减少
。
【考点】基因工程的操作过程综合；DNA片段的扩增与电泳鉴定．
【答案】Taq酶（耐高温DNA聚合酶）、4种脱氧核苷酸；引物A和引物C；引物B；②；利用限制酶（SacⅠ、HindⅢ）分别处理突变基因和载体；利用显微注射法将重组载体注入小鼠受精卵；利用合适的早期胚胎进行胚胎移植；基因分离；IKKB基因突变导致IKKβ含量减少，IKK激酶活力降低，T细胞减少
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：21引用：1难度：0.7
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