欲测定新鲜绿叶中叶绿素a和叶绿素b的含量,可通过测定色素提取液的光密度值(OD值,各吸光物质的总OD值),再根据以下公式计算:叶绿素a浓度=12.72D665-2.59D649;叶绿素b浓度=20.13D649-5.03D665
(D665、D649表示光程为1cm、波长分别为665nm、649nm所测得的OD值)。
仪器与用具:OD值测定仪一套、天平、研钵、25mL容量瓶、漏斗、滤纸、95%乙醇、石英砂、碳酸钙等。
(1)完善实验步骤
①取材:取新鲜植物叶片,擦净,剪碎(去掉中脉),混匀。
②研磨:称取剪碎的新鲜样品0.2g,放入研钵中,加少量石英砂和碳酸钙及2~3mL95%乙醇,充分、迅速研磨成 匀浆匀浆,再加入乙醇10mL,继续研磨至组织变白,并静置3~5min。
③过滤:在漏斗中放置滤纸,用乙醇湿润,把研磨液沿玻璃棒倒入漏斗,过滤到25mL棕色容量瓶中,然后用少量95%乙醇冲洗研棒、玻璃棒、研钵研钵及 残渣残渣数次,洗涤液一并倒入漏斗中过滤,再用95%乙醇,将漏斗中色素全部洗入容量瓶,直至滤纸和残渣变白为止。最后定容至25mL。
④测定:把色素提取液摇匀,倒入 光程为1cm的比色杯光程为1cm的比色杯内,以 95%乙醇95%乙醇为空白对照,在光波长665nm、649nm条件下分别测定OD值。
⑤计算
(2)实验分析:
①过滤和定容选择的容量瓶为棕色的目的是为了防止 叶绿素分解叶绿素分解。在测定叶绿素OD值时,选择波长665nm、649nm的红光,以防类胡萝卜素的干扰,其原因是 类胡萝卜素不吸收红光类胡萝卜素不吸收红光。
②本实验中,不需要不需要(需要/不需要)先作叶绿素a、b的标准曲线用于获得浓度值。
③若根据实验结果计算得到叶绿素a和叶绿素b的浓度分别为Ca、Cb(单位mg/L),则待测植物新鲜叶片中叶绿素的含量是 Ca+Cb8Ca+Cb8mg/g(用Ca、Cb表示)。
C
a
+
C
b
8
C
a
+
C
b
8
【考点】叶绿体色素的提取和分离实验.
【答案】匀浆;研钵;残渣;光程为1cm的比色杯;95%乙醇;叶绿素分解;类胡萝卜素不吸收红光;不需要;
C
a
+
C
b
8
【解答】
【点评】
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发布:2024/6/27 10:35:59组卷:21引用:2难度:0.7
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