抗除草剂转基因作物的推广可有效减轻除草劳动强度、提高农业生产效率。图1为抗除草剂转基因玉米的技术流程。
（1）构建含除草剂抗性基因的表达载体，传统的方法是目的基因通过酶与载体进行重组。载体上目的基因插入位点的限制酶识别序列 不能不能（填“能“或“不能“）出现在目的基因内部，可通过 PCRPCR技术在目的基因两侧添加相应限制酶识别序列，以便构建表达载体。
（2）为了减少限制酶识别序列的影响，科研人员研发了新的DNA重组方法：无缝克隆In-Fusion技术（图2），其中In-Fusion酶可以将任何具有相同15bp末端序列的线性DNA分子进行连接，类似同源重组。
①科研人员希望应用以上方法构建含有A和GUS基因的正组DNA分子，首先获得了3种DNA分子如图3，然后混合进行In-Fusion反应。如果引物2上额外添加的片段对应于GUS基因中加粗的e片段，那么引物1和引物4上额外增加的片段分别对应载体中的片段 a、da、d。完成重组反应后，将产物表达载体加入经过处理的农杆菌中。
②为筛选成功转入目标重组DNA分子的菌落，可以选取引物 1、41、4扩增目的基因并电泳检测。请在图4中画出阳性菌落的电泳结果。
（3）农杆菌转化愈伤组织时，用含 除草剂除草剂的选择培养基筛选转化的愈伤组织。转化过程中，愈伤组织表面常残留农杆菌，导致未转化愈伤组织（假阳性）也可能在选择培养基上生长。已知报告基因GUS表达产物能催化无色物质K呈现蓝色，请叙述排除假阳性的原理。 用无色物质K处理愈伤组织，呈现蓝色的就是转化成功的愈伤组织用无色物质K处理愈伤组织，呈现蓝色的就是转化成功的愈伤组织。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】不能；PCR；a、d；1、4；除草剂；用无色物质K处理愈伤组织，呈现蓝色的就是转化成功的愈伤组织
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：12引用：1难度：0.6
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（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
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